江苏科技大学;镇江市粮食和物资储备质量监测中心(镇江市军粮供应管理中心)李雅琪获国家专利权
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龙图腾网获悉江苏科技大学;镇江市粮食和物资储备质量监测中心(镇江市军粮供应管理中心)申请的专利一种RCA-GO适配体荧光生物传感器的制备方法及应用于同时对AFB1和OTA进行荧光检测获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118566190B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-06发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410688591.X,技术领域涉及:G01N21/64;该发明授权一种RCA-GO适配体荧光生物传感器的制备方法及应用于同时对AFB1和OTA进行荧光检测是由李雅琪;孙青月;蒋欣容;孔德昭;张琪;史巧巧设计研发完成,并于2024-05-30向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种RCA-GO适配体荧光生物传感器的制备方法及应用于同时对AFB1和OTA进行荧光检测在说明书摘要公布了:本发明属于生物传感器及检测技术领域,涉及一种RCA‑GO适配体荧光生物传感器的制备方法,包括:先制得量子点偶联的荧光探针,再制备环状DNA模板CDT,再制得滚圈扩增的产物RCAP,将其与量子点偶联的荧光探针以体积比1:1杂交,加入GO溶液,37℃孵育后制得。本发明还将所制得的RCA‑GO适配体荧光生物传感器应用于对黄曲霉毒素B1AFB1和赭曲霉毒素AOTA进行荧光检测。本发明量子点制备成本低、偶联活性强、制备方法成熟稳定;未与目标物结合的适配体与Padlock结合形成CDT,进行滚圈扩增反应,使荧光信号大大增强,实现对AFB1和OTA的检测,理论基础成熟,可靠性好;与量子点偶联后的荧光探针信号稳定,灵敏度强,形成的双链结构RCAPQDs‑cDNA稳定性好,不易产生假阳性信号。
本发明授权一种RCA-GO适配体荧光生物传感器的制备方法及应用于同时对AFB1和OTA进行荧光检测在权利要求书中公布了:1.一种RCA-GO适配体荧光生物传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: 1量子点偶联的荧光探针的制备 以Tris-HCl缓冲溶液为溶剂,配制含有20mg·mL-1的EDC和10mg·mL-1的NHS的混合溶液; 将2mLg-CNQDs、200µL上述EDC和NHS混合溶液混合,室温孵育1h以活化表面羧基,加入100µLcDNA1,4℃轻轻搅拌12h,10000rpm离心10min,洗涤3次,制得偶联的荧光探针g-CNQDs-cDNA1; 同上步骤,制得偶联的荧光探针CdTeQDs-cDNA2; 所制得的量子点偶联的荧光探针分散在2mLTris-HCl缓冲液中,4℃储存; 2环状DNA模板CDT的制备 将适配体Apt即Apt1与Apt2,和滚环模板Padlock即Padlock1与Padlock2,分别于95℃退火10min,65℃的水浴10min,逐渐冷却至室温; 反应体系包含适配体Apt、滚环模板Padlock、T4连接酶、10×T4连接酶缓冲液和50%PEG4000缓冲液,以体积比为5~10µL:5~10μL:0.5~1μL:1~2μL:1~2μL进行混合,用去离子水配至总体积为20µL,22℃水浴孵育,65℃灭活T4连接酶,得混合物; 3RCAP的制备 将10µL步骤2的混合物加入RCA反应物中,所述RCA反应物中含有体积比为1:3:4的Phi29聚合酶、10×Phi29缓冲液和500µM的dNTPs,加去离子水使总体积为20μL,37℃孵育10h,65℃终止反应10min,以灭活Phi29聚合酶,所得的溶液是滚圈扩增的产物RCAP; 4RCA-GO适配体荧光生物传感器的制备 将滚圈扩增的产物RCAP分别与步骤1所制偶联的荧光探针以体积比1:1杂交并用去离子水补充体积至200µL,37℃水浴中反应,加入5µL200mg·mL-1的GO溶液混合,37℃孵育30min,制得RCA-GO适配体荧光生物传感器。
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