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龙图腾网获悉四川大学申请的专利基于CRISPR-Cas12a的双扩增核酸检测方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116694734B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-06发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210169371.7，技术领域涉及：C12Q1/682；该发明授权基于CRISPR-Cas12a的双扩增核酸检测方法是由刘睿;周静;吕弋;张立春;宋红杰设计研发完成，并于2022-02-24向国家知识产权局提交的专利申请。

本基于CRISPR-Cas12a的双扩增核酸检测方法在说明书摘要公布了：本发明提出了一种基于AuNPs标记的磁性探针的CRISPR‑Cas12a生物测定平台用于HIV相关的核酸检测。核酸扩增策略是用于提高灵敏度的常用方法，但有耗时长、操作复杂、污染风险高以及错配相关的不准确性等缺点。本发明提出了一种无需传统核酸扩增的方法，通过结合CRISPR‑Cas12a的自身放大效应以及金纳米颗粒在电感耦合等离子体质谱法中可检测到的信号强的双扩增方法来实现对目标核酸的灵敏检测。本发明方法对HIV相关核酸的检测可以达到1.05amol的低检测限，并且在胎牛血清的加标回收实验中得到成功验证。

本发明授权基于CRISPR-Cas12a的双扩增核酸检测方法在权利要求书中公布了：1.基于CRISPR-Cas12a的双扩增核酸检测方法，其特征在于，所述双扩增为双信号扩增，所述双信号扩增包括金纳米颗粒标记和CRISPR-Cas12a反式裂解，具体包括以下步骤： 金纳米颗粒溶液的制备：将HAuCl4溶液煮沸后加入3％柠檬酸钠溶液，继续加热直至溶液变成酒红色时停止，冷却后获得金纳米颗粒溶液，即AuNPs溶液； 金纳米颗粒标记的磁性探针溶液的制备：将reporterDNA在TCEP溶液中处理后加入AuNPs溶液中，并加入0.1％的吐温-20溶液和0.5molL柠檬酸钠溶液，得到混合液；混合液中分次加入NaCl溶液并超声，随后室温反应6h以上，经过离心和PB冲洗后获得AuNPs-reporter，将其沉淀分散于Tris-HCl缓冲液中获得AuNPs-reporter的Tris-HCl溶液；将SA-MB分散液稀释1倍后加入AuNPs-reporter的Tris-HCl溶液中反应过夜，进行磁性分离并收集上清液，磁性沉淀物经Hepes溶液洗涤和分散后获得金纳米颗粒标记的磁性探针溶液；所述金纳米颗粒标记的磁性探针的结构主体为一段含75个胸腺嘧啶的reporterDNA，其5’末端连接SA-MB磁性纳米颗粒以便于磁性分离，3’末端修饰了AuNPs作为报告信号； CRISPR-Cas12a的反式裂解反应：反应体系包含1×TOLObuffer3缓冲液、Mg2+、crRNA、Cas12a、金纳米颗粒标记的磁性探针溶液、目的核酸和DEPC水； ICP-MS检测：对反式裂解反应的产物进行磁性分离，收集上清液，经王水消解和稀释后送至ICP-MS进行197Au检测，根据测得结果计算目标核酸含量； 上述方法以非疾病诊断为目的。

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