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龙图腾网获悉上海市第五人民医院申请的专利一种构建哮喘免疫耐受模型的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN108114272B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-06发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：201611064253.0，技术领域涉及：A61K38/38；该发明授权一种构建哮喘免疫耐受模型的方法是由施天昀;何燕超;孙伟;揭志军设计研发完成，并于2016-11-28向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种构建哮喘免疫耐受模型的方法在说明书摘要公布了：本发明涉及动物模型构建领域，公开了一种构建哮喘免疫耐受模型的方法，包括以下步骤，A.建立免疫耐受小鼠模型：让幼鼠每日饮用含质量分数为0.5‑1.5％OVA的无菌水，连续7日，每24h更换饮用水，第八日开始饮用无菌水；第15日予以腹腔注射125ul含质量分数为0.5‑1.5％OVA致敏小鼠，第22日开始予以含质量分数为0.5‑1.5％的OVA雾化激发小鼠1个小时，连续7日；B.免疫耐受小鼠模型的鉴定。本发明通过给刚断奶的小鼠口服OVA直接获得对OVA的免疫耐受，明显缩短了构建哮喘免疫耐受模型的时间，也减少了构建模型的步骤，大大提高了效率。本发明解决了现有技术中母乳耐受构建模型的时间非常长，给母鼠雾化，后期给小鼠雾化等步骤非常繁琐，耗资大的技术问题。

本发明授权一种构建哮喘免疫耐受模型的方法在权利要求书中公布了：1.一种构建哮喘免疫耐受模型的方法，其特征在于，包括以下步骤， A.建立免疫耐受小鼠模型：让幼鼠每日饮用含质量分数为0.5-1.5％OVA的无菌水，连续7日，每24h更换饮用水，第八日开始饮用无菌水；其中幼鼠为3-4周龄的小鼠；第15日予以腹腔注射125ul含质量分数为0.5-1.5％OVA致敏小鼠，第22日开始予以含质量分数为0.5-1.5％的OVA雾化激发小鼠1个小时，连续7日； B.免疫耐受小鼠模型的鉴定；免疫耐受小鼠模型的鉴定包括测定OVA特异性IgE含量；还包括： a.进行支气管肺泡灌洗、进行细胞计数和分类、测定气管肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ细胞因子的含量； b.右肺组织匀浆抽提RNA，用时实定量PCR测定步骤a中细胞因子的mRNA的表达；左肺组织进行苏木素-伊红、高碘酸-席夫氏病理染色； 其中肺组织总RNA的提取：①取小鼠肺200-300mg肺至1.5mlEP管中，加入800ulTrizol试剂，每个EP管中放入一大一小珠子，放入高通量组织研磨器，注意配平，70HZ的频率研磨120秒后取出； ②吸出上述EP管中200ul肺组织匀浆液至新的EP管中，然后加入40ul氯仿，20ulRNasefreeddH2O，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下静置2～3分钟后，12000g，4℃，离心15分钟； ③吸取上层水相置于新EP管中，加入等体积异丙醇彻底混匀，在室温下静置30分钟后，12000g，4℃，离心10分钟； ④弃上清，加入现配的800ul75％乙醇进行洗涤，在手中上下甩几次，直到看到白色絮状物漂浮在酒精中，10000g，4℃，离心5分钟弃上清；重复洗一遍； ⑤尽量吸去残留的上清，然后放置沉淀的RNA在室温中自然干燥； ⑥用Rnase-freewater溶解沉淀，80ul-100ul，放入-80℃冰箱保存。

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