东南大学吴迪获国家专利权
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龙图腾网获悉东南大学申请的专利一种用于神经元核内包涵体病血管交感神经损伤的评估方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120195137B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-02发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510221840.9,技术领域涉及:G01N21/64;该发明授权一种用于神经元核内包涵体病血管交感神经损伤的评估方法是由吴迪;韩依航;陆云南;王燕娟;朱晓华设计研发完成,并于2025-02-27向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种用于神经元核内包涵体病血管交感神经损伤的评估方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种用于神经元核内包涵体病血管交感神经损伤的评估方法;属于生物科学技术领域,其操作步骤如下:皮肤活检、免疫荧光染色、玻片扫描、计算血管肾上腺能小纤维密度。本发明通过皮肤活检获取组织,予以免疫荧光染色后拍摄,运用ImageJ软件对真皮浅层血管经TH抗体标记的交感肾上腺素能小神经密度加以计算,从而精准评估神经元核内包涵体病受体是否存在交感神经损伤及其严重程度。
本发明授权一种用于神经元核内包涵体病血管交感神经损伤的评估方法在权利要求书中公布了:1.一种基于非疾病诊断目的的用于神经元核内包涵体病血管交感神经损伤的评估方法,其特征在于;通过对神经元核内包涵体病和无神经系统疾病对照受体开展皮肤活检,切片后使用TH抗体实施免疫荧光染色,再运用ImageJ软件定量算出真皮浅层血管TH抗体标记的交感肾上腺素能小纤维密度,并分析该密度在两组之间是否有差异,以此评定交感神经损伤情况及其严重程度;其操作步骤如下: 1:皮肤活检;其步骤如下: a.在受体前臂外侧选定活检部位消毒,经2%利多卡因局部麻醉后,用皮肤活检针检取皮肤; 其中,步骤a中,检取皮肤的直径为3mm; b.所取皮肤在4%多聚甲醛浸泡过夜,0.01%PBS清洗后于25%蔗糖溶液浸泡过夜,再以OCT胶包埋; 2:免疫荧光染色;其操作步骤如下: a.以冷冻切片机进行不连续切片; b.使用标记肾上腺素能小纤维的兔酪氨酸羟化酶作为一抗孵育切片过夜; c.使用抗兔AlexaFluor594抗体作为二抗,并室温孵育切片; d.使用DAPI标记细胞核; 其中,步骤a中,不连续切片的厚度为30μm; 步骤c中,室温是20-25℃,切片孵育的时间是:2小时; 3:玻片扫描;具体是:借助共聚焦激光扫描显微镜拍摄切片,依据信号强度与噪声最佳比值选定扫描参数; 设定层间距2μm,放大倍数为×200,采集三维数字图像; 4:计算血管肾上腺能小纤维密度;其操作步骤如下: a.根据TH、DAPI染色图像,通过ImageJ软件手动圈出血管感兴趣区; b.将TH抗体染色的原始荧光图像转换为灰度图像; c.由灰度图像去除背景得到基础图像,基础图像经高斯模糊得到离焦图像,基础图像减去离焦图像得到复合图像; d.调整光阈值以突显TH抗体标记的肾上腺素能神经纤维小纤维; e.分别计算肾上腺能神经纤维面积与血管感兴趣区面积,两者相除得到血管TH抗体标记的肾上腺素能小纤维密度; f.计算每位受体3个血管的肾上腺素能小纤维密度平均值。
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