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龙图腾网获悉广西壮族自治区水牛研究所申请的专利一种利用冻精管冻存生物细胞的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116602292B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-02发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310615343.8，技术领域涉及：A01N1/162；该发明授权一种利用冻精管冻存生物细胞的方法是由于农淇;梁莎莎;李厅厅;鄢胜飞;卢瑛;覃广胜设计研发完成，并于2023-05-29向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种利用冻精管冻存生物细胞的方法在说明书摘要公布了：本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种利用冻精管冻存生物细胞的方法，其特征在于：具体包括以下具体步骤：1收集培养的生物细胞，2冻精管的灌装与密封，3细胞冻存程序，4细胞复苏培养。本发明具有的优点是：采用本发明的技术方案可以使用冻精管进行少量生物细胞的保存，并保证冻存细胞的复苏活性达到与手动冻存相近的程度，具有极大的推广价值。

本发明授权一种利用冻精管冻存生物细胞的方法在权利要求书中公布了：1.一种利用冻精管冻存生物细胞的方法，其特征在于：具体包括以下具体步骤： 1收集培养的生物细胞： 当细胞生长至70%~80%融合度时准备消化冻存，用移液器沿培养皿边缘移除培养液，加入含双抗的DMEM清洗1次，移除DMEM，加入100~500μl1%胰蛋白酶，镜下观察细胞形态变圆或肉眼观察到细胞成片脱离培养皿壁后，加入完全培养基终止消化，吹打均匀后1000rpm离心3min，弃上清，加入细胞冻存液重悬；所述细胞为293T细胞；所述细胞冻存液为所述完全培养基90mL+DMSO二甲基亚砜10mL或所述完全培养基80mL+DMSO二甲基亚砜20mL；所述完全培养基为90mLDMEM高糖培养基+10mLFBS胎牛血清+1万U青链霉素； 2冻精管的灌装与密封： 用1mL移液枪取350μl混匀的细胞液，从无棉塞的一侧注入冻精管，微微倾斜冻精管，使液体流动至冻精管中部，两端留出1~1.5cm；使用止血钳将无棉塞的一侧冻精管0.5cm长度夹扁，将止血钳置于酒精灯上灼烧2~3s，从已夹扁的冻精管中部向管口夹持冻精管1~3s，观察冻精管是否被烫坏；重复灼烧、夹持动作1~2次，倾斜冻精管，观察液体是否流动，调整封口直到液体不流动为止；冻精细管为富士平冻精细管、卡苏牛冻精细管； 3细胞冻存程序： 将灌装密封后的细胞进行冻存，冻存按照以下步骤进行：4℃、10min，-20℃、30min，-80℃、360min，转移至液氮中长期保存； 4细胞复苏培养： 从液氮中取出冻精管，置于38℃水浴解冻30s；解冻后的冻精管用酒精棉球消毒其中一头，观察是否有漏液现象；在无菌环境下，剪开冻精管已消毒的一头，将冻精管垂直立于离心管管口上方，剪开另一头，使液体流入离心管中，1500~3000rpm离心5min，弃上清，加入培养基吹打重悬，重复离心1次，弃上清，加入培养基吹打重悬，转移至培养皿或培养瓶中按一般细胞培养要求培养。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术，可联系本专利的申请人或专利权人广西壮族自治区水牛研究所，其通讯地址为：530010 广西壮族自治区南宁市邕武路24-1号；或者联系龙图腾网官方客服，联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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