江南大学;江苏省中以产业技术研究院汪显峰获国家专利权
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龙图腾网获悉江南大学;江苏省中以产业技术研究院申请的专利一种基于CRISPR/Cas12a和指数滚环扩增检测miRNA155的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115976171B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-02发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211460172.8,技术领域涉及:C12Q1/6844;该发明授权一种基于CRISPR/Cas12a和指数滚环扩增检测miRNA155的方法是由汪显峰;马鑫;周仕英;沈宫乐;钟琳玲设计研发完成,并于2022-11-17向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于CRISPR/Cas12a和指数滚环扩增检测miRNA155的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于CRISPRCas12a和指数滚环扩增检测miRNA155的方法,属于医学检测领域。本发明通过引入携带有两个酶识别位点的哑铃探针为模板,操作简单,无需退火程序。对miRNA155进行指数滚环扩增T‑ERCA,进一步的,T‑ERCA反应的扩增产物ssDNA被CRISPRCas12a识别,并激活其反式切割活性,切割外源单链信号探针,释放荧光信号。T‑ERCA和CRISPRCas12a的双重扩增效应确保了T‑ERCACas12a检测体系具有较高灵敏度,检测范围从1fM到5nM,检测限为0.31fM。本发明提供的方法操作简单,不需要大型仪器,为CRISPRCas传感器平台在临床诊断检测提供新思路和理论基础。
本发明授权一种基于CRISPR/Cas12a和指数滚环扩增检测miRNA155的方法在权利要求书中公布了:1.一种组合物,其特征在于,所述组合物含有CRISPRCas12a蛋白、携带有两个切刻内切酶识别位点的哑铃探针、crRNA、荧光信号探针、DNA聚合酶、切刻内切酶;所述切刻内切酶识别并切割含哑铃探针的扩增产物,所述切刻内切酶包括Nt.BbvCI和或Nb.BtsI; 所述哑铃探针的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示; 所述crRNA的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示;所述荧光信号探针的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示,荧光信号探针的5’端修饰有荧光基团,3’端修饰有淬灭基团。
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