山东省科学院生物研究所张云获国家专利权
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龙图腾网获悉山东省科学院生物研究所申请的专利一种血小板增多伴发血栓斑马鱼模型及其构建方法与应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120700054B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-30发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510931251.X,技术领域涉及:C12N15/85;该发明授权一种血小板增多伴发血栓斑马鱼模型及其构建方法与应用是由张云;张惠雯;孙晨;夏青;李培海;郑特;王玉婷设计研发完成,并于2025-07-07向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种血小板增多伴发血栓斑马鱼模型及其构建方法与应用在说明书摘要公布了:本发明提供了一种血小板增多伴发血栓斑马鱼模型及其构建方法与应用,属于生物技术领域,具体为一种血小板增多伴发血栓斑马鱼模型,是通过在斑马鱼体细胞中过表达CALRdel52得到转基因斑马鱼,利用转基因斑马鱼加入花生四烯酸血栓诱导剂诱导构建;CALRdel52的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示;本发明提供的血小板增多伴发血栓疾病斑马鱼模型能够用于抗血栓治疗药物的筛选,实验周期短,给药量少,有利于微量抗血栓活性天然产物的高通量筛选。
本发明授权一种血小板增多伴发血栓斑马鱼模型及其构建方法与应用在权利要求书中公布了:1.一种血小板增多伴发血栓斑马鱼模型的构建方法,其特征在于,包括如下步骤: 1构建核苷酸序列如SEQIDNO.2所示的Tol2-EF1a-hCALRdel52-IRES2-mcherry-UTRsv40重组表达载体; 2通过显微注射,将步骤1构建的重组表达载体Tol2-EF1a-hCALRdel52-IRES2-mcherry-UTRsv40与Tol2转座酶mRNA导入野生型AB系斑马鱼胚胎中,进行饲养,挑选有红色荧光的斑马鱼即为F0代; 3将步骤2中挑出的F0代斑马鱼饲养至成年斑马鱼后,将其与绿色荧光标记血小板转基因斑马鱼Tgcd41:eGFP杂交,进行饲养,挑选有红绿色荧光的斑马鱼即为F1代,进行鉴定,确定F1代斑马鱼成功遗传了目标基因; 4将步骤3挑出的F1代斑马鱼饲养至成年斑马鱼后自交,挑选有红绿色荧光的斑马鱼即为F2代,进行鉴定,确定F2代斑马鱼成功遗传了目标基因,F2代斑马鱼及其后代均为过表达CALRdel52的转基因斑马鱼Tgcd41:eGFP;EF1a:CALRdel52; 5将步骤4获得的转基因斑马鱼Tgcd41:eGFP;EF1a:CALRdel52饲养至3-4dpf,加入20-80μM花生四烯酸处理20-60min,构建血小板增多伴发血栓斑马鱼模型。
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