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龙图腾网获悉海南一龄医疗产业发展有限公司申请的专利一种基于CRISPR与滚环扩增的双靶标miRNA检测方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN118667956B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-30发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202410818066.5，技术领域涉及：C12Q1/6886；该发明授权一种基于CRISPR与滚环扩增的双靶标miRNA检测方法是由苏学明;王万河;王京;徐万顺;翟英超设计研发完成，并于2024-06-24向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于CRISPR与滚环扩增的双靶标miRNA检测方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种基于CRISPR与滚环扩增的双靶标miRNA检测方法，包括以下步骤：1将挂锁探针、连接DNA与miRNA‑21、miRNA‑155混合，退火处理，在连接酶反应缓冲液体系中用DNA连接酶孵育，然后通过热处理终止反应，获得环状DNA模板；2将环状DNA模板与DNA聚合酶、dNTPs、重组白蛋白、引物和聚合酶反应缓冲液一起孵育，然后通过热处理终止反应，获得RCA产物；3在缓冲液中加入预组装的Cas12a‑crRNA、RCA产物和FQ荧光探针，孵育；4荧光信号的测量。本发明通过检测体系的优化，成功实现了双靶标miRNA的检测，且检测灵敏度高。

本发明授权一种基于CRISPR与滚环扩增的双靶标miRNA检测方法在权利要求书中公布了：1.一种非诊断目的的基于CRISPR与滚环扩增的双靶标miRNA检测方法，其特征在于，包括以下步骤： 1将挂锁探针、连接DNA与miRNA-21、miRNA-155混合，退火处理，在连接酶反应缓冲液体系中用DNA连接酶孵育，然后通过热处理终止反应，获得环状DNA模板；挂锁探针的序列如SEQIDNO.1所示；连接DNA的序列如SEQIDNO.2所示；所述DNA连接酶为SplintR连接酶； 2将环状DNA模板与DNA聚合酶、dNTPs、重组白蛋白、引物和聚合酶反应缓冲液一起孵育，然后通过热处理终止反应，获得RCA产物；所述引物的序列如SEQIDNO.5所示；所述DNA聚合酶为phi29DNA聚合酶； 3在缓冲液中加入预组装的Cas12a-crRNA、RCA产物和FQ荧光探针，孵育；所述crRNA的序列如SEQIDNO.6所示；所述FQ荧光探针的序列为6-FAM-TTTTTT-BHQ1； 4荧光信号的测量。

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