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龙图腾网获悉中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院申请的专利一种诱导肝卵圆细胞系在肝脏去细胞生物支架上形成功能性类肝样器官组织的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN110669721B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-23发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：201910984638.6，技术领域涉及：C12N5/071；该发明授权一种诱导肝卵圆细胞系在肝脏去细胞生物支架上形成功能性类肝样器官组织的方法是由白莲花;陈泉余;夏仁培;游小琳;赖洁娟;蒋施放;张玉君;张宏宇;张雷达设计研发完成，并于2019-10-16向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种诱导肝卵圆细胞系在肝脏去细胞生物支架上形成功能性类肝样器官组织的方法在说明书摘要公布了：本发明涉及一种诱导肝卵圆细胞系在肝脏去细胞生物支架上形成功能性类肝样器官组织的方法，属于生物技术领域，该方法中主要将肝卵圆细胞系HOCL作为种子干细胞，植入具有生物活性的再生期肝脏去细胞生物支架R‑DLS中，根据体外模拟体类肝脏器官发育微环境理念，加入能诱导HOCL肝向功能分化和重建功能性肝脏器官组织结构的条件培养液，在体外3D培养体系中构建功能性类肝样器官组织。该方法中在R‑DLS中经体外3D培养体系的HOCL在2‑24h时就显示了其向功能肝细胞分化，21天即可形成类肝样器官组织，采用本专利方法构建的“新肝脏”对作为肝移植供体和治疗ESLD具有重要临床转换价值。

本发明授权一种诱导肝卵圆细胞系在肝脏去细胞生物支架上形成功能性类肝样器官组织的方法在权利要求书中公布了：1.一种诱导肝卵圆细胞系在肝脏去细胞生物支架上形成功能性类肝样器官组织的方法，其特征在于，所述方法如下： 1将间充质干细胞分别通过门静脉、肝动脉和下腔静脉植入肝脏去细胞生物支架中，加入诱导内皮细胞分化培养液，静态培养5-7天，培养后期逐渐将所述诱导内皮细胞分化培养液替换为诱导胆管细胞分化培养液； 所述诱导内皮细胞分化培养液和诱导胆管细胞分化培养液的制备方法如下： A、按体积比1:4-32将去除细胞成分的哺乳动物胚胎期或新生期肝脏匀浆滤液加入DMEMF12培养液中，再加入青霉素-G、链霉素、L-谷氨酰胺、非必须氨基酸、丙酮酸钠和HEPES，混匀后再加入牛胰岛素、人转铁蛋白、左旋甲状腺素、三碘甲状腺素、亚硒酸钠、腐胺、孕激素和白蛋白，至所述青霉素-G终浓度为100UmL，链霉素终浓度为100μgmL，L-谷氨酰胺终浓度为5mM，非必须氨基酸、丙酮酸钠和HEPES终浓度均为25mM，牛胰岛素终浓度为3.33μgmL，人转铁蛋白终浓度为3.33μgmL，左旋甲状腺素终浓度为0.26μgmL，三碘甲状腺素终浓度为0.22μgmL，亚硒酸钠终浓度为3.33μgmL，腐胺终浓度为1.06μgmL，孕激素终浓度0.04μgmL，白蛋白终浓度为0.04μgmL，获得基础培养液； B、向步骤A中获得的基础培养液中加入内皮细胞生长因子，至所述内皮细胞生长因子终浓度为20ngmL，获得诱导内皮细胞分化培养液； C、向步骤A中获得的基础培养液中加入重组lgr5、重组HNF6和抗-CEBP-β抗体，至所述重组lgr5终浓度为200ngmL，重组HNF6终浓度为200ngmL，抗-CEBP-β抗体终浓度为50ngmL，获得诱导胆管细胞分化培养液； 2将肝卵圆细胞系通过胆管植入经步骤1处理后的肝脏去细胞生物支架中，先静态培养3-5天，后动态培养4-5天，且在所述动态培养期间逐渐将所述诱导胆管细胞分化培养液替换为诱导成熟肝细胞分化培养液； 所述诱导成熟肝细胞分化培养液的制备方法如下： 向所述步骤A中获得的基础培养液中加入重组HNFβ、重组HNF4α、抗-CEBP-α抗体、重组肝细胞生长因子、重组beta-纤维生长因子、抑瘤素M和地塞米松，至所述重组HNFβ终浓度为200ngmL，重组HNF4α终浓度为200ngmL，抗-CEBP-α抗体终浓度为50ngmL，重组肝细胞生长因子终浓度为100ngmL，重组beta-纤维生长因子终浓度为50ngmL，抑瘤素M终浓度为20ngmL，地塞米松终浓度为0.1μM，获得诱导成熟肝细胞分化培养液； 3将肝卵圆细胞系分别通过门静脉、肝动脉和下腔静脉植入经步骤2处理后的肝脏去细胞生物支架中，动静态交替培养至少7天，即可； 所述动静态交替培养中动态培养具体为：在37℃、体积分数为5％CO条件下，按体积为300-500mL的培养容器计，期间每天补加所述诱导成熟肝细胞分化培养液1次，每次5-10mL；每天8:00am-22:00pm，将诱导成熟肝细胞分化培养液通过循环泵输入肝脏去细胞生物支架中，同时以小于20rpm的转速水平旋转培养，所述循环泵的速度为20rpm；所述动静态交替培养中静态培养具体为：每天22:00pm-8:00am静置培养； 所述肝脏去细胞生物支架为具有生物活性的离体再生期肝脏去细胞生物支架。

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