浙江农林大学朱佳妮获国家专利权
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龙图腾网获悉浙江农林大学申请的专利一种基因枪介导的越橘属植物高效转基因体系的建立方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120718953B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-16发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511248145.8,技术领域涉及:C12N15/82;该发明授权一种基因枪介导的越橘属植物高效转基因体系的建立方法是由朱佳妮;吴莹;崔富强;王娇设计研发完成,并于2025-09-02向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基因枪介导的越橘属植物高效转基因体系的建立方法在说明书摘要公布了:本发明提供了一种基因枪介导的越橘属植物高效转基因体系的建立方法。该方法包括:以无菌越橘属植物嫩叶作为外植体,优化了高渗培养基对外植体的处理方法;转基因用的质粒载体包括含有转座酶的第一表达载体和用于目的基因整合的第二表达载体;目的基因整合到第二表达质粒后,与第一表达质粒混合,制成DNA包裹微弹;通过基因枪在无菌条件下将所述DNA包裹微弹对外植体进行轰击;将轰击过的外植体放置在再生培养基上诱导生芽,并通过压力筛选得到阳性转基因植株。该方法能够有效提高越橘属植物的转基因的效率,不受物种限制,可以实现多种野生蓝莓的高效遗传转化,大大缩短了转基因植株的获得周期,填补了该领域的关键技术空白。
本发明授权一种基因枪介导的越橘属植物高效转基因体系的建立方法在权利要求书中公布了:1.一种基因枪介导的越橘属植物高效转基因体系的建立方法,其特征在于,包括: 1以无菌越橘属植物嫩叶作为外植体,远轴面朝上平铺置于高渗培养基中,进行预处理; 所述高渗培养基的配方是:WPM+2%~4%蔗糖+7gL~9gL琼脂+0.05mgL~1.0mgLCPPU+0.05mgL~0.2mgLIBA+0.2molL~0.8molL甘露醇,pH=5.20±0.02; 所述预处理的时间为6~8h; 2利用基因枪技术将混合质粒制成DNA包裹微弹,无菌条件下利用所述DNA包裹微弹对预处理后的外植体进行基因枪轰击; 所述混合质粒由含有转座酶编码基因的第一表达载体和含有目的基因的第二表达载体按1:1~100的摩尔比混合得到; 所述转座酶编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示; 所述基因枪轰击参数为:轰击距离3~9cm;质粒用量1500~3000ng枪; 3轰击结束后,将被轰击的外植体进行诱导生芽,得到转基因阳性植株; 所述诱导生芽,包括:将被轰击的外植体依次经暗培养,光周期诱导培养,再生培养,筛选培养,发芽培养和生根培养后,最终得到转基因芽; 所述暗培养,包括:先在高渗培养基中稳定转化细胞,再转移至不含甘露醇的再生培养基中继续培养; 和或,暗培养中,所述高渗培养基的配方是:WPM+2%~4%蔗糖+7.5gL~9.0gL琼脂+0.05mgL~1.0mgLCPPU+0.05mgL~0.2mgLIBA+0.2molL~0.8molL甘露醇,pH=5.20±0.02; 和或,暗培养中,在所述高渗培养基中培养的时间为16~18h; 和或,暗培养中,所述不含甘露醇的再生培养基的配方是:WPM+2%~4%蔗糖+7.5gL~9.0gL琼脂+0.05mgL~0.8mgLCPPU+0.05mgL~0.2mgLIBA,pH=5.20±0.02; 和或,所述生根培养的条件为:23~25℃条件下光照培养14~18h; 和或,所述生根培养的培养基配方为:WPM+2%~4%蔗糖+7.5gL~9.0gL琼脂+0.2mgL~0.4mgLIAA+0.5mgL~2.0mgLKT+12mgL~18mgLHyg,pH=5.20±0.02。
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