广西壮族自治区林业科学研究院陈博雯获国家专利权
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龙图腾网获悉广西壮族自治区林业科学研究院申请的专利黑格愈伤组织诱导及再生成苗方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120130364B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-12发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510265873.3,技术领域涉及:A01H4/00;该发明授权黑格愈伤组织诱导及再生成苗方法是由陈博雯;杨章旗;陈虎;梁桂婵;方小英;罗群凤;龚桂芳;安琪设计研发完成,并于2025-03-07向国家知识产权局提交的专利申请。
本黑格愈伤组织诱导及再生成苗方法在说明书摘要公布了:本发明属于植物培育技术领域,特别是一种黑格黑格愈伤组织诱导及再生成苗方法。包括如下步骤:对黑格进行愈伤组织诱导,再将愈伤组织再生诱导培养得到再生芽,进一步经过继代培养和生根培养得到幼苗。本发明方法提高了愈伤再生诱导率。
本发明授权黑格愈伤组织诱导及再生成苗方法在权利要求书中公布了:1.一种黑格愈伤组织诱导及再生成苗方法,其特征在于,包括如下步骤:对黑格进行愈伤组织诱导,再将愈伤组织再生诱导培养得到再生芽,进一步经过继代培养和生根培养得到幼苗; 所述的愈伤组织诱导采用愈伤诱导培养基;以黑格无菌播种获得小苗的下胚轴为外植体; 所述愈伤诱导培养基按重量份计由以下成分制成:硝酸钾383~565份、硝酸铵302~430份、磷酸二氢钾32~44份、七水硫酸镁56~96份、二水氯化钙49~147份、碘化钾0.05~0.25份、硼酸0.74~2.21份、四水硫酸锰3.68~6.38份、七水硫酸锌1.23~2.95份、五水硫酸铜0.004~0.008份、乙二胺四乙酸二钠7.86~10.56份、七水硫酸亚铁5.87~7.89份、肌醇12.27~31.91份、甘氨酸0.25~0.74份、盐酸硫胺素0.017~0.032份、烟酸0.025~0.049份、蔗糖6137~8592份、琼脂1350~1841份、萘乙酸0.001~0.006份、N6-呋喃甲基腺嘌呤0.01~0.05份,6-苄氨基嘌呤0.02~0.05份; 愈伤组织再生诱导培养使用再生诱导培养基,所述再生诱导培养基按重量份计由以下成分制成:硝酸钾383~565份、硝酸铵302~430份、磷酸二氢钾32~44份、七水硫酸镁56~96份、二水氯化钙49~147份、碘化钾0.05~0.25份、硼酸0.74~2.21份、四水硫酸锰3.68~6.38份、七水硫酸锌1.23~2.95份、五水硫酸铜0.004~0.008份、乙二胺四乙酸二钠7.86~10.56份、七水硫酸亚铁5.87~7.89份、肌醇12.27~31.91份、甘氨酸0.25~0.74份、盐酸硫胺素0.017~0.032份、烟酸0.025~0.049份、蔗糖6137~8592份、琼脂1350~1841份、萘乙酸0.01~0.04份、N6-呋喃甲基腺嘌呤0.001~0.006份,6-苄氨基嘌呤0.03~0.07份,吲哚乙酸0.01~0.04份; 所述再生诱导具体处理为:将黑格愈伤组织切块后浸泡在0.5~2μgμl的DNA溶液中,抽真空10~15min后取出愈伤小块,切口朝下放置在再生诱导培养基上; DNA溶液制备方法:以pCAMBIA系列或pBI121植物表达载体为基础,利用35S或其他植物表达启动子驱动序列1构建重组质粒并导入大肠杆菌,菌株过夜培养物在超净台中提取质粒;获得的质粒经nanodrop定量后,用无菌超纯水调整至0.5~2μgμl浓度; 所述序列1为如SEQ.NO1所示; 所述的再生芽继代培养使用继代培养基;所述继代培养基按重量份计由以下成分制成:硝酸钾383~565份、硝酸铵302~430份、磷酸二氢钾32~44份、七水硫酸镁56~96份、二水氯化钙49~147份、碘化钾0.05~0.25份、硼酸0.74~2.21份、四水硫酸锰3.68~6.38份、七水硫酸锌1.23~2.95份、五水硫酸铜0.004~0.008份、乙二胺四乙酸二钠7.86~10.56份、七水硫酸亚铁5.87~7.89份、肌醇12.27~31.91份、甘氨酸0.25~0.74份、盐酸硫胺素0.017~0.032份、烟酸0.025~0.049份、蔗糖6137~8592份、琼脂1350~1841份、萘乙酸0.001~0.004份、6-苄氨基嘌呤0.05~0.1份,吲哚乙酸0.08~0.015份; 生根培养使用生根培养基;所述生根培养基按重量份计由以下成分制成:硝酸钾89~148份、硝酸铵69~78份、磷酸二氢钾7~10份、七水硫酸镁12~22份、二水氯化钙12~31份、碘化钾0.05~0.23份、硼酸0.7~2.1份、四水硫酸锰3.5~6.06份、七水硫酸锌1.17~2.80份、乙二胺四乙酸二钠7.46~10.02份、七水硫酸亚铁5.58~7.49份、肌醇11.66~30.31份、甘氨酸0.23~0.7份、盐酸硫胺素0.016~0.03份、烟酸0.023~0.047份、蔗糖2798~6061份、琼脂1399~1748份、吲哚乙酸0.09~0.13份、吲哚丁酸0.06~0.11份。
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