湖北科技学院鲁素蕊获国家专利权
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龙图腾网获悉湖北科技学院申请的专利一种胶红酵母多拷贝质粒、胶红酵母转化、目的基因高效过表达胶红酵母菌株及其构建方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119570835B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-12发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411841303.6,技术领域涉及:C12N15/81;该发明授权一种胶红酵母多拷贝质粒、胶红酵母转化、目的基因高效过表达胶红酵母菌株及其构建方法是由鲁素蕊;邓文龙;郭艺;莫启贵;苏延停;马萍;杨旭设计研发完成,并于2024-12-13向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种胶红酵母多拷贝质粒、胶红酵母转化、目的基因高效过表达胶红酵母菌株及其构建方法在说明书摘要公布了:本申请提出了一种胶红酵母多拷贝质粒、胶红酵母转化、目的基因高效过表达胶红酵母菌株及其构建方法,涉及基因工程技术领域。该质粒的构建方法包括:筛选出遗传霉素为野生胶红酵母的抗性标记;以质粒YEp352为模板,P1‑FR为引物进行扩增,获得线性化质粒片段;以带有同源臂的遗传霉素抗性表达盒的DNA序列为模板,G1‑FR为引物进行扩增,得到带有同源序列的目的基因片段;将线性化质粒片段与带有同源序列的目的基因片段进行组装,再转化大肠杆菌感受态细胞中,最后进行阳性菌落鉴定。本申请提出的多拷贝质粒具备多重克隆位点和选择标记,使得在胶红酵母中进行基因组改造更加灵活方便,可以稳定高效地表达目的基因。
本发明授权一种胶红酵母多拷贝质粒、胶红酵母转化、目的基因高效过表达胶红酵母菌株及其构建方法在权利要求书中公布了:1.一种胶红酵母多拷贝质粒应用于胶红酵母基因高效表达,其特征在于,所述胶红酵母多拷贝质粒的序列为SEQIDNO.2; 所述胶红酵母多拷贝质粒的构建方法包括以下步骤: S1、筛选出遗传霉素为野生胶红酵母的抗性标记; S2、以质粒YEp352为模板,P1-FP1-R为引物,对质粒YEp352进行PCR扩增,获得线性化质粒片段;其中P1-F的序列为SEQIDNO.3,P1-R的序列为SEQIDNO.4; S3、以人工合成带有同源臂的遗传霉素抗性表达盒的DNA序列为模板,序列为SEQIDNO.1,以G1-FG1-R为引物进行扩增,得到带有同源序列的目的基因片段;其中G1-F的序列为SEQIDNO.5,G1-R的序列为SEQIDNO.6; S4、将上述线性化质粒片段与带有同源序列的目的基因片段进行组装,再转化大肠杆菌Top10感受态细胞中,最后进行阳性菌落鉴定。
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