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龙图腾网获悉中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所申请的专利一种同时检测尿液样品中90种类固醇激素及其代谢物的试剂盒、检测方法及样品预处理方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN118858479B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-12发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411018570.3，技术领域涉及：G01N30/02；该发明授权一种同时检测尿液样品中90种类固醇激素及其代谢物的试剂盒、检测方法及样品预处理方法是由施小明;唐宋;查玉娥;常红;马晓设计研发完成，并于2024-07-26向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种同时检测尿液样品中90种类固醇激素及其代谢物的试剂盒、检测方法及样品预处理方法在说明书摘要公布了：本发明提供一种同时检测尿液样品中90种类固醇激素及其代谢物的试剂盒、检测方法及样品预处理方法，所述试剂盒包括90种类固醇激素及其代谢物混标工作液、内标工作液、基质、复溶剂和洗脱液，还包括液液萃取剂、稳定剂、酸性溶液、缓冲液和酶解液。本发明采用酶解液对尿液样品酶解，并结合液液萃取、超高效液相色谱‑三重四级杆串联质谱方法，针对每种类固醇激素分别进行定性分析和定量分析，标准曲线的R2均大于0.990。本发明突破性地实现了对尿液样本中90种类固醇激素及其代谢物的同时检测。操作简便快速，通量高，能实时精确有效地监测人体尿液中类固醇激素及其代谢物水平，具有广泛的应用前景。

本发明授权一种同时检测尿液样品中90种类固醇激素及其代谢物的试剂盒、检测方法及样品预处理方法在权利要求书中公布了：1.一种同时检测尿液样品中90种类固醇激素及其代谢物的方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤： SS1制备待测标准品 以去除类固醇激素的人工尿液为基质，将所述基质分别与浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、40.0、50.0、100.0、200.0、400.0和500.0ngmL的90种类固醇激素及其代谢物混标工作液以体积比1000:50的比例混合，并对所述基质与90种类固醇激素及其代谢物混标工作液的混合溶液进行预处理，得待测标准品； SS2制备待测样品 对待测尿液样品进行预处理，得待测样品； SS3上机检测 使用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪分别对待测标准品和待测样品进行检测分析，并记录色谱图中待测标准品或待测样品中各类固醇激素及其代谢物的峰面积与内标峰面积； SS4结果分析 以90种类固醇激素及其代谢物混标工作液浓度为横坐标x，以“目标物峰面积内标峰面积×类固醇激素同位素内标工作液浓度”为纵坐标y，绘制出标准曲线，其中，所述目标物峰面积为90种类固醇激素及其代谢物混标工作液中各类固醇激素及其代谢物的峰面积，所述内标峰面积为类固醇激素同位素内标工作液中类固醇激素及其代谢物同位素的峰面积，根据所述标准曲线以及所述待测样品中各类固醇及其代谢物的峰面积与内标峰面积的比值得到尿液样品中各类固醇及其代谢物的含量； 其中， 在所述步骤SS1和SS2中，所述预处理包括对样品进行酶解处理以及液液萃取，包括： S1样品制备 将样品与类固醇激素及其代谢物同位素内标工作液涡旋混匀，离心得上清液，向所述上清液中加入酸性溶液、稳定剂、缓冲液1和酶解液，充分涡旋后得到提取液，其中，所述类固醇激素及其代谢物同位素内标工作液为浓度为50.0ngmL的类固醇激素及其代谢物同位素内标甲醇溶液，所述酸性溶液为乙酸，所述稳定剂为浓度为6%wv的抗坏血酸，所述缓冲液1为醋酸钠缓冲液，所述酶解液为β-葡萄糖醛酸酶芳基硫酸酶，其中β-葡萄糖醛酸酶的酶活为10.8UmL、芳基硫酸酶的酶活为25UmL，所述基质或所述待测尿液样品、类固醇激素及其代谢物同位素内标工作液、酸性溶液、稳定剂、缓冲液1、酶解液体积比为1000：50：5：10：100：60，所述酶解液的体积为60µL，加入所述酸性溶液和缓冲液1后溶液的pH值为5-6； S2样品提取 向S1样品制备步骤制备得到的所述提取液中加入缓冲液2、液液萃取剂后充分涡旋，离心取上清液，重复向除去所述上清液的剩余提取液中加入液液萃取剂后充分涡旋，离心取上清液，合并两次上清液，得到待测前样品，其中，所述缓冲液2为碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液，所述液液萃取剂为体积比为1:1的叔丁基甲醚乙酸乙酯混合液，所述样品、缓冲液2、液液萃取剂体积比为1：1：4，两次加入的所述液液萃取剂的体积均为2mL，加入所述缓冲液2后溶液的pH值为9-10； S3浓缩和定容 将S2步骤得到的所述待测前样品离心浓缩至干后，用复溶剂复溶，充分涡旋、离心取上层清液，得到待测标准品或待测样品，其中所述复溶剂为纯甲醇； 在所述步骤SS3中，超高效液相色谱条件为：色谱柱为PoroshellHPH-C18，柱温40℃，进样体积为2μL，洗脱液包括洗脱液A和洗脱液B，流速为0.4mLmin；梯度如下：0min，40%洗脱液B；0-4min，40%-55%洗脱液B；4-8min，55%-70%洗脱液B；8-13min，70-85%洗脱液B；13-14min，85%-100%洗脱液B；14-17min，100%洗脱液B；17-20min，100%-60%洗脱液B；20min，60%洗脱液B，所述洗脱液A为超纯水，所述洗脱液B为纯甲醇； 质谱条件为：采用电喷雾离子源，检测模式为正离子模式，质谱检测采用多反应监测模式，离子源温度为150℃，脱溶剂气温度为450℃，脱溶剂气流量为900LHr，碰撞气流量为150Lh，毛细管电压为3.0kV； 所述90种类固醇激素及其代谢物为雌酮、17α-雌二醇、17β-雌二醇、17α-乙炔基雌二醇、2-甲基雌二醇、4-羟基雌酮、2-羟基雌酮、2-甲基雌酮、4-甲基雌酮、雌三醇、表睾酮、甲睾酮、睾酮、雄烯二酮、脱氢表雄酮、1,4-雄烯二酮、11β-羟雄烯二酮、雄诺龙、19-羟基雄烯二酮、5β-雄烷-3,17-二酮、睾内酯、肾上腺甾酮、宝丹酮、群勃龙、苯丙酸去甲睾酮、诺龙、孕酮、孕烯醇酮、20α-羟基孕酮、20β-羟基孕酮、5β-二氢孕酮、5α-二氢孕酮、6β-羟孕酮、11α-羟孕酮、17α-羟孕酮、4-孕烯-17α,20α-二醇-3-酮、4-孕烯-17α,20β-二醇-3-酮、地屈孕酮、1,6-双脱氢孕酮、16α-甲基孕酮、1-去氢黄体酮、16-去氢黄体酮、Delta-6-黄体酮、6-羰基黄体酮、11α-羟孕酮醋酸、苯甲孕酮、炔诺酮、醋酸炔诺酮、炔孕酮、甲基炔诺酮、孕二烯酮、依托孕烯、脱乙酰诺孕酯、诺孕酯、米非司酮、甲羟孕酮、醋酸甲羟孕酮、16,17-环氧孕酮、17α-羟孕酮醋酸酯、17-羧基孕酮、醋酸环丙孕酮、醋酸美仑孕酮、醋酸地马孕酮、氯地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸氟孕酮、四氢脱氧皮质醇、皮质酯酮、21-脱氧皮质酮四醇、可的松、甲强龙、α-皮酮四醇、β-皮酮四醇、11-脱氧皮质酮、脱氧皮质醇、3α,5β-四氢皮质醇、利美索隆、布地奈德、氟尼缩松、曲安奈德、氟轻松、去羟米松、氯倍他索、氟米松、丙酸氯倍他索、丙酸氯硫卡松、丙酸氟替卡松、11-氧代丙酸氟替卡松、17-戊酸酯氢化可的松和螺内酯。

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