成都锦城学院;四川农业大学陈舜获国家专利权
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龙图腾网获悉成都锦城学院;四川农业大学申请的专利黄病毒的复制依赖的RNA重组实验系统的建立和应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120818539B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-09发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511316126.4,技术领域涉及:C12N15/63;该发明授权黄病毒的复制依赖的RNA重组实验系统的建立和应用是由陈舜;王晨懿;贺煜;程安春;汪铭书设计研发完成,并于2025-09-16向国家知识产权局提交的专利申请。
本黄病毒的复制依赖的RNA重组实验系统的建立和应用在说明书摘要公布了:本发明中公开了一种黄病毒的复制依赖的RNA重组实验系统的建立和应用,属于生物技术领域。该RNA重组系统包括两个组份:坦布苏病毒E基因缺失的亚基因组复制子CQW1‑ΔE,以及缺失了部分NS1基因序列的缺陷型病毒基因组CQW1‑ΔNS1或MM1775‑ΔNS1。这两个组份单独都不能产生子代病毒,但将二者共转染后,由于RNA的重组,仅在转染后几天内就可产生大量的重组子代病毒,重组效率极高,且不需要连续传代,极大的缩短了构建周期,节约了生产成本;同时,产生的子代病毒在细胞上可形成噬斑,通过噬斑计数,可应用于定量测量RNA重组的效率高低,分析影响坦布苏病毒RNA重组的关键因素。
本发明授权黄病毒的复制依赖的RNA重组实验系统的建立和应用在权利要求书中公布了:1.一种黄病毒的复制依赖的RNA重组实验系统,其特征在于,包括组份A和组份B;所述组份A为坦布苏病毒缺失了E蛋白第11‑472位氨基酸残基的复制子质粒;所述组份B为缺失了NS1基因序列第437‑878nt的缺陷型坦布苏病毒基因组质粒或缺失了NS1基因序列第434‑869nt的缺陷型坦布苏病毒基因组质粒; 所述组份A为pACYC‑CQW1‑ΔE质粒,基因序列如SEQ ID NO.2所示; 所述缺失了NS1基因序列第437‑878nt的缺陷型坦布苏病毒基因组质粒为pACYC‑CQW1‑ΔNS1质粒; 所述pACYC‑CQW1‑ΔNS1质粒的制备方法:以坦布苏病毒CQW1株感染性克隆质粒为模版,扩增得到CQW1‑P2‑ΔNS1片段,序列如SEQ ID NO.3所示;将pACYC‑FL‑CQW1质粒用XhoI和PmlI进行双酶切,获得线性化载体,利用同源重组法将CQW1‑P2‑ΔNS1片段与线性化的pACYC‑FL‑CQW1相连接,经单克隆筛选获得pACYC‑CQW1‑ΔNS1质粒; 所述缺失了NS1基因序列第434‑869nt的缺陷型坦布苏病毒基因组质粒为pACYC‑MM1775‑ΔNS1质粒; 所述pACYC‑MM1775‑ΔNS1质粒的制备方法:以坦布苏病毒MM1775株为模板,扩增获得MM1775‑P1‑ΔNS1片段,序列如SEQ ID NO.4所示;将pACYC‑MM1775‑P2‑3质粒用NruI和SacI进行双酶切线性化,所述pACYC‑MM1775‑P2‑3质粒序列如SEQ ID NO.5所示;利用同源重组法将MM1775‑P1‑ΔNS1片段与线性化的pACYC‑MM1775‑P2‑3相连接,经单克隆筛选获得pACYC‑MM1775‑ΔNS1质粒。
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