中国水产科学研究院淡水渔业研究中心轩中亚获国家专利权
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龙图腾网获悉中国水产科学研究院淡水渔业研究中心申请的专利一种基于牙本质87Sr/86Sr比值精准识别长江江豚与东亚江豚的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119355102B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-25发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411556999.8,技术领域涉及:G01N27/626;该发明授权一种基于牙本质87Sr/86Sr比值精准识别长江江豚与东亚江豚的方法是由轩中亚;刘凯;华忠;蔺丹清;应聪萍;尹登花;张家路设计研发完成,并于2024-11-04向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于牙本质87Sr/86Sr比值精准识别长江江豚与东亚江豚的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于牙本质87Sr86Sr比值精准识别长江江豚与东亚江豚的方法,包括以下步骤:采集江豚牙齿样本,牙齿前处理,牙本质87Sr86Sr比值分析,牙齿生长层组测量,重建87Sr86Sr比值变化,将不同的牙本质87Sr86Sr比值变化阶段的平均值分别与长江干流和海洋87Sr86Sr比值进行对比,判断其形成期间江豚的生境类型,从而根据生境类型判断其为长江江豚或东亚江豚,为判别长江口死亡江豚个体的物种提供重要依据。
本发明授权一种基于牙本质87Sr/86Sr比值精准识别长江江豚与东亚江豚的方法在权利要求书中公布了:1.一种基于牙本质87Sr86Sr比值精准识别长江江豚与东亚江豚的方法,其特征在于,包括以下步骤: 步骤1采集江豚牙齿样本:采集野外死亡江豚的下颌左侧中间较直的牙齿,如果个体腐烂严重,则尽可能取临近位置的牙齿,如果牙齿缺失过多,则尽量选择磨损不严重的牙齿; 步骤2牙齿前处理:将牙齿拔下,浸泡在胰蛋白酶溶液中24h之后,使用超声波震荡胰蛋白溶液中的牙齿,将牙齿表面和牙髓腔中附着的软组织去除,之后使用去离子水反复震荡清洗牙齿外表面和牙髓腔内部;使用冷镶嵌树脂将清洗烘干后的牙齿包埋,使用小型切割机的金刚石锯片沿牙齿冠状面最长轴切割,将牙齿切成两部分;使用砂纸精细研磨切开的部分冠状面,然后使用抛光布和二氧化硅悬浮液抛光;抛光后使用去离子水清洗牙齿切片并烘干; 步骤3牙本质87Sr86Sr比值分析:使用激光剥蚀连接多接收电感耦合等离子体质谱仪从牙尖到牙髓腔对牙本质进行线扫描分析,以获得牙本质的87Sr86Sr比值;使用激光剥蚀连接多接收电感耦合等离子体质谱仪进行牙本质87Sr86Sr比值分析,分析采用中分辨模式进行;激光剥蚀连接多接收电感耦合等离子体质谱实验中激光能量密度为6.5Jcm2,剥蚀的斑束直径为64μm,频率为10Hz,剥蚀速度为5μms;每次进行激光烧蚀前,测量每种同位素的背景强度,测量200个循环,取平均值用于样品分析时的空白背景校正;通过在每次分析开始和结束时以及分析期间每隔30分钟测量磷灰石标样和现代海洋鲨鱼牙齿的87Sr86Sr比值来评估江豚牙齿样品87Sr86Sr比值的准确性和可重复性;通过设置多接收电感耦合等离子体质谱仪的法拉第杯配置,接收mz为82、83、83.5、84、85、86、86.5、87和88处信号;在数据分析的过程中,使用“峰值零点”法,通过从每个分析周期中减去空白背景的平均信号来校正Kr干扰;接收mz为82处的信号以监测42Ca40Ar42Ca40Ca峰;通过监测85Rb信号根据同位素比计算得出87Rb,并对87Rb85Rb进行了仪器质量分馏校正;校正过程假设Rb和Sr有相同的质量分馏因子,首先用测得的88Sr与86Sr信号,根据88Sr86Sr在自然界同位素丰度比值8.375209,使用指数定律计算质量分馏因子,根据质量分馏因子及87Rb85Rb的自然界同位素丰度比值0.38567,计算校正后的87Rb85Rb,从而得到校正后的87Rb;从mz为87中扣除校正后的87Rb,按照校正87Rb85Rb的步骤对扣除87Rb后的87Sr86Sr比值进行仪器质量分馏校正,得到经过质量分馏校正和干扰校正的测量值; 步骤4牙齿生长层组测量:使用生物偏光显微镜拍摄牙齿图像,分辨牙本质的生长层组,使用图像测量软件沿87Sr86Sr比值分析的激光扫描线测量生长层组宽度,将87Sr86Sr比值变化与生长时间联系起来; 步骤5重建87Sr86Sr比值变化:分析牙本质从牙釉质界面到牙髓腔的87Sr86Sr比值,分析牙本质87Sr86Sr比值的变化以及变化发生的位置;将划分出的不同的牙本质87Sr86Sr比值变化阶段的平均值分别与长江干流和海洋87Sr86Sr比值进行对比,判断其形成期间江豚的生境类型,从而根据生境类型判断其为长江江豚或东亚江豚;采用编程统计软件R中的CHANGEPOINT对87Sr86Sr比值原始检测值数据进行分析,获得个体的87Sr86Sr比值发生显著变化的点,从而得到87Sr86Sr比值未有显著变化的平稳阶段,并计算平稳阶段的87Sr86Sr比值平均值;将平均值分别与长江干流和海洋87Sr86Sr比值进行对比,判断其形成期间江豚的生境类型,从而根据生境类型推断江豚的物种; 长江干流87Sr86Sr比值为0.7100-0.7110,海洋87Sr86Sr比值为0.7092。
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