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龙图腾网获悉深圳市第二人民医院(深圳市转化医学研究院)申请的专利同时测定血液中总睾酮和游离睾酮含量的方法及试剂盒获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115754070B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-25发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211481184.9，技术领域涉及：G01N30/02；该发明授权同时测定血液中总睾酮和游离睾酮含量的方法及试剂盒是由李卫峰;刘文兰;黄荣梅;罗卡;许蕴;吴亦可;徐勇设计研发完成，并于2022-11-24向国家知识产权局提交的专利申请。

本同时测定血液中总睾酮和游离睾酮含量的方法及试剂盒在说明书摘要公布了：本发明公开了一种同时测定血液中总睾酮和游离睾酮含量的方法，包括以下步骤：步骤一、将血液样本分成A、B两部分样本，A样本经处理得到样本总睾酮溶液；步骤二、B样本经平衡透析、衍生化反应得到样本游离睾酮溶液；步骤三、用复溶溶液复溶样本总睾酮溶液和样本游离睾酮溶液并混合，得到样本总溶液；步骤四、用LC‑MSMS技术同时检测并得到样本总溶液中的总睾酮和游离睾酮的含量，本发明具有同时测定总睾酮和游离睾酮含量的有益效果。本发明提供一种同时测定总睾酮和游离睾酮的试剂盒，能够快速检测总睾酮和痕量的游离睾酮，检测游离睾酮检测限可达0.5pgmL。

本发明授权同时测定血液中总睾酮和游离睾酮含量的方法及试剂盒在权利要求书中公布了：1.同时测定血液中总睾酮和游离睾酮含量的方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤一、将血液样本分成A、B两部分样本，在A样本中加入萃取液经振荡、离心、取上层清液、浓缩上层清液得到样本总睾酮溶液，其中，所述萃取液中含有睾酮的同位素内标物； 步骤二、B样本经平衡透析得到游离睾酮透析液，在所述游离睾酮透析液中加入睾酮的同位素内标物，然后在加热条件下进行衍生化反应，所述衍生化反应的条件为：温度为60~80℃，时间为40~70min，采用的衍生化试剂为盐酸羟胺的甲醇水溶液、甲氧基胺的甲醇水溶液中的任意一种，所述衍生化试剂的浓度为0.02~0.06molL，所述甲醇水溶液中的甲醇质量分数为20%~80%，在衍生化反应结束后的游离睾酮透析液中加入萃取液经液液萃取、离心、取上层清液并浓缩，得到样本游离睾酮溶液，其中，在加入萃取液前，先将衍生化反应结束后的游离睾酮透析液冷却至2~8℃，并加入水进行稀释； 步骤三、加入复溶溶液复溶步骤一中的所述样本总睾酮溶液和步骤二中的所述样本游离睾酮溶液并混合均匀，得到样本总溶液； 步骤四、用睾酮标准品分别配制多种标曲浓度梯度的总睾酮标曲溶液和游离睾酮标曲溶液，并加入睾酮的同位素内标物，用LC-MSMS技术测定每个标曲浓度下对应的睾酮及其内标峰面积，以标曲浓度、睾酮及其内标峰面积比进行线性回归，得到总睾酮标准曲线和游离睾酮标准曲线，通过LC-MSMS同时检测得到所述样本总溶液中的总睾酮及其内标峰面积比、游离睾酮及其内标峰面积比，并代入所述标准曲线计算得到所述样本总溶液中的总睾酮和游离睾酮的含量，其中，配制游离睾酮标曲溶液时睾酮标准品的处理方法与步骤二中所述游离睾酮透析液的处理方法相同； 所述LC-MSMS采用色谱条件为：流动相Ⅰ为甲酸的水溶液，流动相Ⅱ为甲酸的甲醇溶液，进行梯度洗脱，其中，流动相Ⅰ和流动相Ⅱ形成了液相洗脱试剂； 梯度洗脱程序为：0min时，流动相Ⅰ为60%，流动相Ⅱ为40％，流速0.2mLmin；1.2min时，流动相Ⅰ为60%，流动相Ⅱ为40％，流速0.2mLmin；1.5min时，流动相Ⅰ为0%，流动相Ⅱ为100％，流速0.2mLmin；5.2min时，流动相Ⅰ为0%，流动相Ⅱ为100％，流速0.2mLmin；5.5min时，流动相Ⅰ为60%，流动相Ⅱ为40％，流速0.2mLmin；7min时，流动相Ⅰ为60%，流动相Ⅱ为40％，流速0.2mLmin。

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