江南大学;中国科学院天津工业生物技术研究所张文立获国家专利权
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龙图腾网获悉江南大学;中国科学院天津工业生物技术研究所申请的专利一种酮糖3-差向异构酶固定化酶的制备方法及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116083409B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-11发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310160691.0,技术领域涉及:C12N9/90;该发明授权一种酮糖3-差向异构酶固定化酶的制备方法及其应用是由张文立;沐万孟;任虎;李瑾;徐炜;朱莺莺;倪大伟;石婷设计研发完成,并于2023-02-23向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种酮糖3-差向异构酶固定化酶的制备方法及其应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种酮糖3‑差向异构酶固定化酶的制备方法及其应用,属于固定化酶制备技术领域,本发明分为以下步骤:第一步,对阴离子交换树脂进行预处理;第二步,离子交换树脂吸附蛋白酶;第三步,加入戊二醛进行交联。本发明制备的固定化酶制备简单,价格低廉,反应条件简单温和。固定化提高了酶的相对活性和稳定性,制备得到的固定化酶结合牢靠,可进行多次酶催化反应。这一发现对于工业化制备D‑阿洛酮糖具有重要的研究价值。
本发明授权一种酮糖3-差向异构酶固定化酶的制备方法及其应用在权利要求书中公布了:1.一种固定酮糖3-差向异构酶的方法,其特征在于,所述方法包括,将Labedellaendophytica来源的酮糖3-差向异构酶添加至含有经预处理后的D301大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂的反应体系中进行吸附;加入戊二醛交联剂对酶进行交联后得到固定化酮糖3-差向异构酶;所述酮糖3-差向异构酶的氨基酸序列在NCBI上的编号为WP_127049469.1; 所述预处理后的离子交换树脂的处理方法为:1用两倍树脂体积的95%乙醇浸泡20h,弃杂液,并用体积分数为10%氯化钠溶液浸泡12h,再用去离子水洗去杂质和浮色,直至溶液pH呈中性;2以体积分数为2%的盐酸溶液浸泡步骤1处理后的树脂12h,用去离子水洗涤,直至溶液pH呈中性;3再以体积分数为5%的氢氧化钠溶液浸泡树脂12h,用去离子水洗涤,直至溶液pH呈中性;经预处理的树脂用两倍树脂体积的去离子水浸泡,存放于4℃冰箱中备用;使用时将树脂抽滤擦干; 所述反应体系的总体积为2mL,所述反应体系中含有终浓度为50mM的pH8.0的Tris-HCl缓冲液,树脂添加量为0.5g,所述酮糖3-差向异构酶在反应体系中的添加量为:0.4mg蛋白g树脂,将反应体系在18℃摇床吸附2h,置于4℃静置30min后,加入0.01%的戊二醛进行交联,置于4℃交联1h;弃上清液,用去离子水洗涤,真空抽滤得到固定化D-阿洛酮糖3-差向异构酶,于4℃保存备用。
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