南京师范大学李卉卉获国家专利权
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龙图腾网获悉南京师范大学申请的专利一种测定适配体和小分子靶标间相互作用的非变性质谱检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119804610B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-07发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411948498.4,技术领域涉及:G01N27/62;该发明授权一种测定适配体和小分子靶标间相互作用的非变性质谱检测方法是由李卉卉;沈启凯;王晓萌;陈大勇设计研发完成,并于2024-12-27向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种测定适配体和小分子靶标间相互作用的非变性质谱检测方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种测定适配体和小分子靶标间相互作用的非变性质谱检测方法,包括一种覆有导电涂层的喷雾针;适配体和靶标分子储备液的配制;及其混合溶液的一级质谱分析,得到两者的结合比;串联质谱模式对复合物离子的稳定性进行分析;本发明包含的检测方法中,一方面使用了纳米尺寸的电喷雾发射喷雾针,对于含有较高浓度的非挥发性盐样品溶液,显著减少复合物形成的加合物与离子团簇,提高分辨能力和信噪比,且操作简便,样品用量小;另一方面,通过非变性质谱检测可直观获得结合的化学计量关系以及结合前后适配体的稳定性变化;此方法能够快速准确鉴定核酸适配体与靶标分子间的相互作用,有望进一步应用于核酸适配体的快速筛选和序列优化。
本发明授权一种测定适配体和小分子靶标间相互作用的非变性质谱检测方法在权利要求书中公布了:1.一种测定适配体和小分子靶标间相互作用的非变性质谱检测方法,其特征在于,包括以下步骤: 1配制适配体水溶液、小分子靶标储备液、醋酸铵缓冲液; 2将小分子靶标储备液和适配体水溶液加入到醋酸铵缓冲液中混合均匀,静置孵育30min后,得到复合物;采用喷雾针对结合样品进行一级质谱分析,得到适配体和靶标分子相互作用的一级谱图,根据信号峰所带电荷数和mz值计算得到两者的结合计量比; 3使用串联质谱模式,以适配体和靶标分子形成的结合计量比为1:2的复合物离子为母离子,利用质谱的高能碰撞解离技术对母离子施加一系列能量值E,记录此过程中母离子和碎片离子的相对信号强度随能量值的变化;在此引入一个参数IRa,定义为适配体和靶标分子形成的复合物离子与所有络合和游离的适配体总量的比值,如公式1所示;在特定碎裂能量值下得到对应的IRa值,将得到的这组数据进行Boltzmann非线性拟合,如公式2所示,得到复合物的解离曲线,进而得到IRa值下降到一半时对应的碎裂能量E12; m=1-4;x=5-8 其中,∑Ir[Apt+mL]x-代表适配体-靶标复合物离子的相对丰度之和,∑Ir[Apt]x-代表游离适配体离子的相对丰度之和;m代表适配体结合的靶标分子数,x代表适配体和复合物离子峰所带电荷数; IRa=A1+A21+expE-E12A32; 其中,A1、A2、A3均为常数; 步骤2中,所用喷雾针为纳米电喷雾电离源配套的硼硅玻璃发射器喷针,长度2cm; 外径1.2mm,内径0.94mm,针尖内径2μm。
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