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龙图腾网获悉中国人民解放军军事科学院军事医学研究院申请的专利一种复杂样本中的γ-H2AX的LC-MS/MS定量分析方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119619351B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-07发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411798026.5，技术领域涉及：G01N30/02；该发明授权一种复杂样本中的γ-H2AX的LC-MS/MS定量分析方法是由徐华;李治;谢剑炜;赵晓童;陈佳;马波;聂志勇;王朝霞;高鹏霞设计研发完成，并于2024-12-09向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种复杂样本中的γ-H2AX的LC-MS/MS定量分析方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种复杂样本中的γ‑H2AX的LC‑MSMS定量分析方法，它包括如下步骤：1配制标准曲线工作溶液；2配制内标工作溶液；3配制标准曲线样品；4配制含内标的标准曲线样品；5待测样品处理；6待测样品溶液、含内标的标准曲线样品溶液进行LC‑MSMS分析；7根据内标‑标准曲线法对待测样品中H2AX、γ‑H2AX含量进行定量分析；8评估组织样本里磷酸化标志物的DNA损伤值。本发明解决了尚没有准确的复杂样本中的γ‑H2AX的定量分析方法这一技术难题。

本发明授权一种复杂样本中的γ-H2AX的LC-MS/MS定量分析方法在权利要求书中公布了：1.一种小鼠组织样本中的γ-H2AX的LC-MSMS定量分析方法，所述的方法包括如下步骤： 1小鼠组织样本前处理 ①提取 A、100mg小鼠组织加入1mL的1×PBS匀浆60s，4℃300g离心5min沉淀； B、加入1mL低渗缓冲液，4℃震荡10min； C、4℃1500g离心5min，沉淀用1mL高渗缓冲液重悬，4℃震荡10min； D、4℃1500g离心5min使染色质沉淀，并重悬于400μL0.4M的H2SO4，4℃下震荡30min； E、4℃16000g离心10min使样品沉淀，取上清液中加入132μL三氯乙酸，冰浴30min以沉淀组蛋白； F、4℃16000g离心10min沉淀组蛋白，用500μL预冷丙酮洗涤两次，并在室温下风干； ②酶解 A、1:50比例加入测序级胰酶过夜； B、第二天加入2μL的20％醋酸终止； ③脱盐 使用GL-Tip-GC脱盐小柱脱盐，步骤如下： A、20μL的0.1％三氟乙酸80％乙腈3000g离心2min润洗； B、20μL的0.1％三氟乙酸20％乙腈3000g离心2min平衡； C、弃废液，GL-Tip-GC脱盐小柱中加入样品； D、20μL的0.1％三氟乙酸20％乙腈3000g离心2min洗涤； E、20μL的0.1％三氟乙酸80％乙腈3000g离心2min洗脱； F、洗脱获得的肽段样品真空离心浓缩至干； ④富集 采用polyMAC磷酸肽富集试剂盒进行富集，步骤如下： A、干燥样品加入200μL的缓冲液重悬； B、PolyMAC肽段富集磁珠充分涡旋10-20s后，取50μL于1.5mL的离心管中，瞬离2-3s然后去除上层储存液； C、将重悬后的样品加入到含有polyMAC肽段富集磁珠的离心管中，然后置于混匀仪中，26℃1200rpm，剧烈摇晃25min； D、样品加入PolyMACTips中，20g2min离心，若有残余液体，100g1min离心，确保液体从Tips尖端流出到离心管中； E、使用新的离心管，PolyMACTips中加入200μL的缓冲液I，20g离心2min，若有残余液体，100g离心1min，确保液体从Tips尖端流出到离心管中； F、加入200μL的清洗液I，20g离心2min，若有残余液体，100g离心1min； G、再加入200μL的清洗液II，20g离心2min，若有残余液体，100g离心1min，收集E、F、G中的H2AX待测； H、新离心管加入50μL的洗脱液，20g2min离心，重复一次离心100g1min，收集γ-H2AX； I、收集的γ-H2AX冻干后-80℃保存或0.1％甲酸水复溶LC-MSMS检测； 2LC-MSMS分析 液相色谱条件为： 色谱柱：C18；流动相A：体积分数为0.1％甲酸溶液；流动相B：乙腈； 流速：0.2～0.4mLmin； 柱温：35～45℃； 进样量：5～20μL； 洗脱方式为梯度洗脱，梯度洗脱程序如下： 0～6.0min，A相从99％降为50％，B相从1％升到50％； 6.0～6.1min，A相从50％降为45％，B相从50％升到55％； 6.1～8.0min，A相从45％降为5％，B相从55％升到95％； 8.0～8.1min，A相为5％，B相为95％； 8.1～10.0min，A相从5％升为99％，B相从95％降为1％； 质谱条件：多反应监测MRM模式，电喷雾离子源ESI，正离子模式，离子源温度：500℃； 所述多反应监测MRM模式的参数如下：

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