江苏大学陈全胜获国家专利权
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龙图腾网获悉江苏大学申请的专利用于海洋生物毒素检测的比率生物传感器及其制备和应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118190910B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-07发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410412414.9,技术领域涉及:G01N21/65;该发明授权用于海洋生物毒素检测的比率生物传感器及其制备和应用是由陈全胜;魏文雅;李欢欢;吴继忠;朱阿芳设计研发完成,并于2024-04-08向国家知识产权局提交的专利申请。
本用于海洋生物毒素检测的比率生物传感器及其制备和应用在说明书摘要公布了:本发明公开了用于海洋生物毒素检测的比率生物传感器及其制备和应用,比率生物传感器包括具有特异性检测的生物磁性元件FA、催化反应溶液和SERS增强纳米基底;其中,将适体锚定的磁性颗粒Fe3O4‑Apt与金标记的短互补DNAAu‑cDNA相结合,以产生生物磁性元件FA。在检测时若存在靶标,Au‑cDNA被解离,分离的AucDNA用作催化剂,在氢源存在下引发4‑硝基硫代苯酚4‑NTP的还原反应,导致4‑NTP的SERS光谱发生比值变化。这种变化最终在SERS增强纳米基底被采集。该比率生物传感器的设计能够有效克服由光谱波动引起的不稳定检测响应,具有自校准能力和高鲁棒性。
本发明授权用于海洋生物毒素检测的比率生物传感器及其制备和应用在权利要求书中公布了:1.一种用于海洋生物毒素检测的比率生物传感器制备方法,其特征在于,比率生物传感器包括具有特异性检测的生物磁性元件FA、催化反应溶液和SERS增强纳米基底; 所述生物磁性元件FA的制备方法为:合成羧基化磁性纳米颗粒Fe3O4-COOH,将其依次与链霉亲和素SA和5′-末端生物素标记的适配体Apt结合,形成Fe3O4-Apt复合物;将适配体的片段互补链cDNA接枝到金纳米粒子AuNPs表面,形成Au-cDNA复合物;通过碱基对互补键将Au-cDNA与Fe3O4-Apt杂交,形成生物磁性元件FA; 所述催化反应溶液的制备方法:混合4-硝基硫代苯酚4-NTP和硼氢化钠以获得催化反应溶液; 所述SERS增强纳米基底的制备方法:将金纳米颗粒沉积在固相载体表面,形成SERS增强纳米基底; 所述生物磁性元件FA合成步骤包括: 1通过热分解法合成羧基化磁性纳米颗粒,将六水合氯化铁、柠檬酸三钠和乙二醇混合并充分搅拌;接着,加入乙酸铵并持续搅拌25~35分钟;随后,将均匀的前体转移到聚四氟乙烯衬里的高压釜中,并在200℃下加热8小时;完成后,将Fe3O4产物缓慢冷却至室温,并用乙醇和水进行冲洗;六水合氯化铁、柠檬酸三钠、乙二醇和乙酸铵的质量比为1.0802:0.2:20:1.2g; 2合成Fe3O4-Apt步骤为:将制备的Fe3O4、N-3-二甲基胺基丙基-N'-乙基碳二亚胺和N-羟基磺基琥珀酰亚胺加入到0.01M的MES缓冲液中,并进行机械搅拌3小时;接着,通过磁性分离将羧基活化的Fe3O4从混合物中分离出来,并用水和乙醇洗涤三次;然后,将链霉亲和素SA分散到羧酸活化的Fe3O4中,并在37℃下孵育12小时;通过用PBS缓冲液洗涤三次,彻底纯化得到的Fe3O4-SA;接下来,加入0.8~1.2μM的Apt溶液,在37℃下孵育6~10小时后,通过磁性分离将反应的Fe3O4-Apt复合物分离,并用PBS缓冲液洗涤以去除过量的适配体;所述Fe3O4,EDC,NHS,MES,SA,Apt比值为0.01g:0.04g:0.02g:20g:0.1g:100μL; 3合成Au-cDNA步骤为:通过柠檬酸三钠还原法合成不同尺寸的AuNPs;将1%的四水合氯化金溶解在水中,并剧烈搅拌约1分钟;随后,将1%柠檬酸三钠溶液快速添加到沸腾的溶液中,并连续回流30分钟;将制备的AuNPs与50nM的cDNA混合,并在37℃下轻轻摇动过夜,以获得Au-cDNA复合物;所述四水合氯化金,水,柠檬酸三钠溶液,cDNA的量比为50μL:10mL:0.5~1mL:5mL; 4FA合成步骤包括:将50μL,0.8~1.2mgmL的Fe3O4-Apt注入到2mL的Au-cDNA中,并在37℃下混合8小时以形成FA。
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