浙江大学陈利萍获国家专利权
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龙图腾网获悉浙江大学申请的专利枸杞与番茄水平基因转移体系建立及转化根获得的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116439059B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-31发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310137276.3,技术领域涉及:A01G17/00;该发明授权枸杞与番茄水平基因转移体系建立及转化根获得的方法是由陈利萍;张爱珺;袁璐;王挺进;刘柯;杨洋;王瑞婷设计研发完成,并于2023-02-20向国家知识产权局提交的专利申请。
本枸杞与番茄水平基因转移体系建立及转化根获得的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了枸杞与番茄水平基因转移体系建立及转化根获得的方法,以茄科植物番茄和枸杞等为起始材料,通过降低枸杞细胞的木质素含量,消除远缘嫁接细胞之间隔离层,使两个物种嫁接细胞连通,并通过对番茄接穗进行不同生长素处理,在番茄嫁接组织部位诱导出不定根。通过形态学与分子生物学研究分析,证明了嫁接介导的枸杞与番茄细胞之间发生了水平基因转移,诱导的不定根为枸杞水平基因转移到番茄的转化根。本发明建立了枸杞基因向番茄高效转移的技术体系并获得了转化根,实现了草本植物与木本植物遗传资源的优势互补。具有转化根系的番茄植株根系的活力好,植株生长势强,生长周期长。转化根的获得对提升番茄产量、品质、抗性等都具有重要意义。
本发明授权枸杞与番茄水平基因转移体系建立及转化根获得的方法在权利要求书中公布了:1.枸杞与番茄水平基因转移体系建立及转化根获得的方法,其特征在于,包括如下步骤: 1选取木质素含量低且适于嫁接的枸杞苗作为砧木,其中木质素含量为204.92-256.76sg; 2选取生长至3叶1心番茄苗,将番茄苗距子叶0.5cm处的上胚轴切下,利用外源生长素进行处理5min,从上胚轴底部沿中心线对称切割两刀,使切好的番茄上宽下窄呈楔形,作为嫁接接穗与枸杞砧木进行嫁接建立枸杞与番茄高效嫁接体系,诱导番茄嫁接区域再生不定根; 3观察番茄嫁接区域不定根的起源、出根后的形态,并提取番茄嫁接区域不定根的基因组DNA,若再生的不定根的根系分级明显且检测到枸杞的DNA片段则说明获得转化根;其中,判断番茄嫁接区域不定根是否检测到枸杞的DNA片段的方法为: 提取番茄嫁接区域不定根基因组DNA,进行基因组重测序;进行生物信息学分析,利用Linuxcat命令将枸杞基因组与番茄基因组进行连接,将与番茄比对上的Reads去除,得到剩余Reads与枸杞基因组进行映射,将有读序映射区间的序列提取出来,得到多条相应的DNA片段;根据映射到的序列设计引物,进行PCR验证;从而确定番茄嫁接组织部位不定根中含有此段枸杞DNA片段;将番茄基因组与映射到的序列混合作为参考基因组,寻找一端比对到番茄基因组一端比对到目标序列的Reads;将其中没比对上枸杞的一段截下来形成短片段,blast到参考基因组,并保留blast结果显示只能匹配上番茄的短片段,进行筛选;若筛选得到则说明再生的不定根检测到枸杞的DNA片段。
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