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龙图腾网获悉山西医科大学申请的专利一种人诱导多能干细胞诱导分化建立肝脏类器官的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115820539B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-31发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211562602.7，技术领域涉及：C12N5/071；该发明授权一种人诱导多能干细胞诱导分化建立肝脏类器官的方法是由解军;冯志伟;周冰蕊;穆箭兵;刘志贞;徐钧;魏云亮;王晓玲;帅旗志;黄婷娟设计研发完成，并于2022-12-07向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种人诱导多能干细胞诱导分化建立肝脏类器官的方法在说明书摘要公布了：本发明涉及一种人诱导多能干细胞诱导分化建立肝脏类器官的方法。所述方法包括：人多能干细胞培养、定向内胚层的诱导、前肠内胚层的诱导、FG细胞3D扩增及肝脏类器官诱导培养和肝脏类器官成熟。所述方法克服了现有技术的缺点，首先，人诱导多能干细胞可以由人体的血液细胞、皮肤细胞等去分化诱导而来，解决了细胞来源的问题；另外，由于多能干细胞的全能性，由多能干细胞分化来的肝脏类器官可以生成含有多种细胞成分的肝脏类器官，再加上由多能干细胞生成类器官的方案中可以对干细胞进行基因编辑和标记，并可以大批量、标准化进行分化，因此具有广阔的应用前景。

本发明授权一种人诱导多能干细胞诱导分化建立肝脏类器官的方法在权利要求书中公布了：1.一种人诱导多能干细胞诱导分化建立肝脏类器官的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： I人多能干细胞培养： 1、采用mTeSR1培养基，于低生长因子基质胶包被的培养板上培养人诱导多能干细胞，待所述人诱导多能干细胞的细胞密度达到75~85%时，采用Accutase酶消化成单细胞； 2、将所述单细胞重新接种于另一低生长因子基质胶包被的培养板上，并加入ROCKinhibitor进行培养，所述ROCKinhibitor为Y-27632； II定向内胚层的诱导，分化第1~3天： S1、分化第1天，待细胞生长至细胞密度达70~90%时进行分化，弃去mTeSR1培养基，将细胞加入至含有重组人骨形态发生蛋白-4和重组人激活素A的RPMI1640培养基中进行培养； S2、分化第2天，待步骤S1培养结束后，弃去步骤S1中的培养基，重新加入含有重组人激活素A和血清替代物的RPMI1640培养基继续进行培养； S3、分化第3天，待步骤S2培养结束后，弃去步骤S2中的培养基，重新加入含有重组人激活素A和血清替代物的RPMI1640培养基继续进行培养，直至细胞诱导分化为定向内胚层； III前肠内胚层的诱导，分化第4~6天： 弃去步骤S3中的培养基，加入添加有重组人成纤维细胞生长因子-10、CHIR99021、血清替代物、非必需氨基酸和青链霉素双抗的高糖DMEM培养基进行培养，直至诱导为前肠内胚层； IV前肠内胚层细胞3D扩增及肝脏类器官诱导培养，分化第7-13天： SS1、分化第7天，弃去步骤III中的培养基，采用Accutase酶消化为单细胞并用基质胶重悬后滴加至培养板中固化，然后加入由CHIR99021、重组人成纤维细胞生长因子-2、A83-01、EGF表皮细胞生长因子、血清替代物、非必需氨基酸、青链霉素双抗和高糖DMEM培养基组成的培养基，并进行培养； SS2、分化第9天，待步骤SS1培养结束后，弃去步骤SS1中的培养基，然后加入由CHIR99021、重组人成纤维细胞生长因子-2、A83-01、EGF表皮细胞生长因子、维甲酸、血清替代物、非必需氨基酸、青链霉素双抗和高糖DMEM培养基组成的培养基，并进行培养；其中： 所述CHIR99021的浓度为3μM、所述重组人成纤维细胞生长因子-2的浓度为5ngmL、所述A83-01的浓度为0.5μM、所述EGF表皮细胞生长因子的浓度为20ngmL、所述维甲酸的浓度为2μM、所述血清替代物的浓度为10vol%、所述非必需氨基酸的浓度为1%，所述青链霉素双抗的浓度为1%； SS3、分化第11天，待步骤SS2培养结束后，弃去步骤SS2中的培养基，然后加入由维甲酸、血清替代物、非必需氨基酸、青链霉素双抗和高糖DMEM培养基组成的培养基，并进行培养； V肝脏类器官成熟，分化13天后： 分化第13天，待分化过程中出现细胞团时，弃去步骤SS3中的培养基，然后加入含有地塞米松、重组人肿瘤抑制素M和重组人肝细胞生长因子的肝细胞培养基以诱导肝脏类器官成熟。

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