广州星业科技股份有限公司师瑞获国家专利权
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龙图腾网获悉广州星业科技股份有限公司申请的专利重组毕赤酵母菌株及其构建方法和用途获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120624508B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-17发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511148832.2,技术领域涉及:C12N15/81;该发明授权重组毕赤酵母菌株及其构建方法和用途是由师瑞;孟巨光;韩双艳;叶春婷设计研发完成,并于2025-08-18向国家知识产权局提交的专利申请。
本重组毕赤酵母菌株及其构建方法和用途在说明书摘要公布了:本申请实施例提出一种重组毕赤酵母菌株及其构建方法和用途。所述构建方法包括:以毕赤酵母菌株为宿主菌株,在宿主菌株中构建苯丙氨酸解氨酶与酪氨酸解氨酶的双合成途径,得到第一工程菌株;基于代谢工程解除第一工程菌株的分支酸反馈抑制,得到第二工程菌株;优化第二工程菌株的芳香族氨基酸合成途径,得到第三工程菌株;敲除第三工程菌株的分支代谢途径,得到第四工程菌株;增加第四工程菌株的前体供应,得到重组毕赤酵母菌株;本申请实施例提供的构建方法能系统性优化对香豆酸的合成路径,构建了以甲醇为碳源高效生产对香豆酸的重组毕赤酵母菌株,该重组毕赤酵母菌株与宿主菌株相比,对香豆酸的产量显著提升。
本发明授权重组毕赤酵母菌株及其构建方法和用途在权利要求书中公布了:1.一种重组毕赤酵母菌株的构建方法,其特征在于,所述构建方法包括: 以毕赤酵母菌株为宿主菌株,在宿主菌株中构建苯丙氨酸解氨酶与酪氨酸解氨酶的双合成途径,得到第一工程菌株;所述毕赤酵母菌株为重组巴斯德毕赤酵母菌株S12,所述重组巴斯德毕赤酵母菌株S12的基因型为his4-,PGAP-PpPSA-TAOX1,PAOX1-PpPET2-TAOX1; 基于代谢工程解除第一工程菌株的分支酸反馈抑制,得到第二工程菌株; 优化第二工程菌株的芳香族氨基酸合成途径,得到第三工程菌株; 敲除第三工程菌株的分支代谢途径,得到第四工程菌株; 增加第四工程菌株的前体供应,得到重组毕赤酵母菌株; 其中,所述在宿主菌株中构建苯丙氨酸解氨酶与酪氨酸解氨酶的双合成途径,包括: 将苯丙氨酸解氨酶AtPAL2的编码基因整合在宿主菌株的染色体PNSI-2位点、将肉桂酸羟化酶AtC4H的编码基因和P450还原酶AtATR2的编码基因整合在宿主菌株的染色体PNSII-4位点、将酪氨酸解氨酶FjTAL的编码基因整合在宿主菌株的染色体PNSII-5位点; 所述苯丙氨酸解氨酶AtPAL2的编码基因的GeneID为824493;所述肉桂酸羟化酶AtC4H的编码基因的GeneID为817599;所述P450还原酶AtATR2的编码基因的GeneID为829144;所述酪氨酸解氨酶FjTAL的编码基因的SequenceID为WP_012023194.1; 所述基于代谢工程解除第一工程菌株的分支酸反馈抑制,包括: 将分支酸变位酶突变体Aro7G141S的编码基因整合到第一工程菌株的染色体PNSI-8位点中,使用PAOX1启动子控制分支酸变位酶突变体Aro7G141S的表达; 所述分支酸变位酶突变体Aro7G141S由分支酸变位酶Aro7发生G141S突变后制得;所述分支酸变位酶Aro7的编码基因的GeneID为856173; 所述优化第二工程菌株的芳香族氨基酸合成途径,包括: 将预苯酸脱水酶ScPHA2的编码基因整合到第二工程菌株的染色体PNSI-6位点中,使用PAOX1启动子控制预苯酸脱水酶ScPHA2的表达;所述预苯酸脱水酶ScPHA2的编码基因的GeneID为855400; 所述敲除第三工程菌株的分支代谢途径,包括: 采用基因编辑技术敲除第三工程菌株的内源苯丙酮酸脱羧酶Aro10-1的编码基因;所述内源苯丙酮酸脱羧酶Aro10-1的编码基因的GeneID为8199377; 所述增加第四工程菌株的前体供应,包括: 将内源性果糖-1,6-二磷酸酶的编码基因整合到第四工程菌株的染色体PNSII-6位点中,使用PAOX1启动子控制内源性果糖-1,6-二磷酸酶的过表达;所述内源性果糖-1,6-二磷酸酶的编码基因的GeneID为8199670。
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