天津科技大学徐庆阳获国家专利权
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龙图腾网获悉天津科技大学申请的专利一种胞嘧啶核苷生产菌株及其构建方法与应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120158413B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-17发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510637749.5,技术领域涉及:C12N1/21;该发明授权一种胞嘧啶核苷生产菌株及其构建方法与应用是由徐庆阳;赵润泽;李长庚;范文静设计研发完成,并于2025-05-19向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种胞嘧啶核苷生产菌株及其构建方法与应用在说明书摘要公布了:本发明提供了一种胞嘧啶核苷生产菌株及其构建方法与应用,所述菌株利用CRIPSRCas9基因编辑技术在E.coliUR12基因组上构建获得,敲除cdd基因、cmk基因;弱化核苷三磷酸还原酶基因nrdD;过表达核苷三磷酸焦磷酸水解酶基因nudG、核苷二磷酸激酶基因ndk和携带突变点的尿苷酸激酶基因pyrHD93A,异源引入且多拷贝谷氨酸棒状杆菌携带突变点的胞苷三磷酸合酶基因pyrGD160E、E162A、E168K,cgl和酿酒酵母的双功能核苷酸酶基因PHM8sce,所获得的菌株遗传稳定性好、发酵产率高,可稳定生产胞嘧啶核苷。
本发明授权一种胞嘧啶核苷生产菌株及其构建方法与应用在权利要求书中公布了:1.一种胞嘧啶核苷生产菌株,其特征在于:是利用定向改造方法在出发菌株E.coliUR12的基础上进行进一步改造获得的,具体为:在E.coliUR12基因组上敲除cdd基因、cmk基因,弱化核苷三磷酸还原酶基因nrdD,过表达核苷三磷酸焦磷酸水解酶基因nudG、核苷二磷酸激酶基因ndk和携带突变点的尿苷酸激酶基因pyrHD93A,异源引入表达谷氨酸棒状杆菌CorynebacteriumglutamicumATCC13032的携带突变点的胞苷三磷酸合酶基因pyrGD160E、E162A、E168K,cgl和酿酒酵母SaccharomycescerevisiaeS288c的双功能核苷酸酶基因PHM8sce;其中,核苷二磷酸激酶基因ndk、携带突变点的尿苷酸激酶基因pyrHD93A和携带突变点的胞苷三磷酸合酶基因pyrGD160E、E162A、E168K,cgl是通过人工操纵子pyrGD160E、E162A、E168K,cgl-pyrHD93A-ndk来进行同步多拷贝的,所述人工操纵子pyrGD160E、E162A、E168K,cgl-pyrHD93A-ndk的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.14所示;用人工启动子PBBa_j23114替换核苷三磷酸还原酶基因nrdD的天然启动子,所述核苷三磷酸还原酶基因nrdD的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.3所示,所述人工启动子PBBa_j23114的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.4所示,所述核苷三磷酸还原酶基因nrdD的天然启动子核苷酸序列如序列表SEQIDNO.5所示;在fhiA、yjiV、yeeL三个位点上依次整合核苷三磷酸焦磷酸水解酶基因nudG,并用人工启动子trc调控,所述人工启动子trc的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.6所示,核苷三磷酸焦磷酸水解酶基因nudG核苷酸序列如序列表SEQIDNO.7所示;在ycdN、yncK两个位点上依次整合所述人工操纵子pyrGD160E、E162A、E168K,cgl-pyrHD93A-ndk;所述谷氨酸棒状杆菌CorynebacteriumglutamicumATCC13032的携带突变点的胞苷三磷酸合酶基因pyrGD160E、E162A、E168K,cgl核苷酸序列如序列表SEQIDNO.8所示,携带突变点的尿苷酸激酶基因pyrHD93A核苷酸序列如序列表SEQIDNO.9所示,核苷二磷酸激酶基因ndk核苷酸序列如序列表SEQIDNO.10所示;在ychG、yghE两个位点依次整合经密码子优化后的酿酒酵母SaccharomycescerevisiaeS288c的双功能核苷酸酶基因PHM8sce,并用人工启动子trc调控;所述双功能核苷酸酶基因PHM8sce的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.11所示。
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