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龙图腾网获悉南京师范大学申请的专利一种评估胰蛋白酶与黄酮类化合物间相互作用的竞争性结合方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119804609B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-17发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411948495.0，技术领域涉及：G01N27/62；该发明授权一种评估胰蛋白酶与黄酮类化合物间相互作用的竞争性结合方法是由李卉卉;王晓萌;沈启凯;陈大勇设计研发完成，并于2024-12-27向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种评估胰蛋白酶与黄酮类化合物间相互作用的竞争性结合方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种评估胰蛋白酶与黄酮类化合物间相互作用的竞争性结合方法，该方法在质谱的竞争模式下，通过电喷雾电离质谱ESI‑MS分析不同黄酮类化合物与胰蛋白酶的相互作用，引入参数R不仅可以比较亲和力的相对强弱，并且判断不同的黄酮类化合物对胰蛋白酶的结合是否存在竞争关系，进而推测不同的黄酮类化合物在胰蛋白酶上的结合位点是否相同；本方法操作简单、快速、准确度高，可以为快速筛选胰蛋白酶抑制剂提供可行的方案。

本发明授权一种评估胰蛋白酶与黄酮类化合物间相互作用的竞争性结合方法在权利要求书中公布了：1.一种评估胰蛋白酶与黄酮类化合物间相互作用的竞争性结合方法，其特征在于，包括以下步骤： S01、配制胰蛋白酶储备溶液，将胰蛋白酶干粉用超纯水溶解，配制成胰蛋白酶原液；将NH4OAc缓冲溶液和胰蛋白酶原液混合，12000rmin转速下用10K的超滤膜进行离心20min，温度4℃，保留超滤膜内溶液，用NH4OAc缓冲溶液稀释，重复离心4～5次；使用NanoDrop2000超微量分光光度计对其进行定浓，得到胰蛋白酶储备溶液，-4℃冷藏并避光保存； S02、配制黄酮类化合物储备溶液：将黄酮类化合物P1粉末、黄酮类化合物P2粉末分别溶于甲醇中，配制成1mmolL的黄酮类化合物P1储备液、黄酮类化合物P2储备液，-4℃冷藏并避光保存； S03、ESI-MS结合实验，将胰蛋白酶储备液、黄酮类化合物P1储备溶液、NH4OAc缓冲溶液和超纯水混合均匀，室温孵育10min；检测前加入甲醇，得到ESI-MS样品溶液，进行质谱分析； S04、ESI-MS竞争实验，将胰蛋白酶储备液、黄酮类化合物P1储备溶液、黄酮类化合物P2储备溶液、NH4OAc缓冲溶液和超纯水混合均匀，室温孵育10min；检测前加入甲醇，得到ESI-MS样品溶液，进行质谱分析； S05、评估胰蛋白酶和黄酮类化合物相对亲和力：参数R表示胰蛋白酶-黄酮复合物离子的相对丰度之和与胰蛋白酶及其复合物离子的相对丰度之和的比值，如下式所示；若R值越大，则说明黄酮类化合物与胰蛋白酶的亲和力越强; 其中，代表不同电荷的胰蛋白酶-黄酮类化合物复合离子的峰的相对丰度之和，代表不同电荷的游离态未结合黄酮类化合物的胰蛋白酶的峰的相对丰度之和；n＝1-4，m＝8-10； S06、判断不同黄酮类化合物与胰蛋白酶结合是否存在竞争关系：ΔRR％为加入黄酮类化合物P2前后，黄酮类化合物P1与胰蛋白酶结合的R值相对变化; 其中，R代表在竞争模式下得到的黄酮类化合物P1与胰蛋白酶的R值，R0代表在结合模式下得到的黄酮类化合物P1与胰蛋白酶的R值;若ΔRR％0，表示P2的加入有利于P1与胰蛋白酶的结合，P1和P2可能存在协同作用；若ΔRR％0，表示P2的加入不利于P1与胰蛋白酶的结合，P1和P2则可能存在竞争作用；若ΔRR％＝0，则表示P2的加入对P1与胰蛋白酶的结合没有显著影响，二者不存在竞争关系。

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