中国科学院华南植物园;仁善田园(广东)农业科技发展有限公司曾晶珏获国家专利权
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龙图腾网获悉中国科学院华南植物园;仁善田园(广东)农业科技发展有限公司申请的专利一种基于朱顶红愈伤组织的农杆菌介导的转基因方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119286926B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-17发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411544355.7,技术领域涉及:C12N15/84;该发明授权一种基于朱顶红愈伤组织的农杆菌介导的转基因方法是由曾晶珏;曾宋君;房林;杨维;邓莎;吴坤林;陈砚设计研发完成,并于2024-10-31向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于朱顶红愈伤组织的农杆菌介导的转基因方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于朱顶红愈伤组织的农杆菌介导的转基因方法。所述方法包括愈伤组织的诱导和增殖、农杆菌侵染、共培养、以及抗性愈伤组织筛选。本发明公开了愈伤组织诱导培养基、继代培养基、共培养培养基和筛选培养基等配方,农杆菌侵染的时间和菌液浓度,以及乙酰丁香酮浓度,首次建立了以愈伤组织为受体的朱顶红遗传转化体系,有利于进行分子定向育种,加速优良外源基因向朱顶红的转移,改良朱顶红品种,为朱顶红产业化发展提供新的思路,具有重要的应用前景。
本发明授权一种基于朱顶红愈伤组织的农杆菌介导的转基因方法在权利要求书中公布了:1.一种基于朱顶红愈伤组织的农杆菌介导的转基因方法,其特征在于,包括以下步骤: S1、愈伤组织的诱导和增殖:以朱顶红试管苗叶片为外植体在愈伤组织诱导培养基中培养诱导出愈伤组织,挑选长势良好的愈伤组织在继代培养基上进行继代培养,所述愈伤组织诱导培养基为:MS+3.0-3.5mgL6-BA+2.0-3.0mgLNAA+1.0mgLKT+20-30gL蔗糖+5.0-6.0gL琼脂pH5.4-5.8、MS+3.0-3.5mgL6-BA+2.0-3.0mgLNAA+0.25mgLTDZ+20-30gL蔗糖+5.0-6.0gL琼脂pH5.4-5.8或MS+1.0-1.5mgLNAA+1.0-1.5mgLKT+0.1-0.25mgLTDZ+20-30gL蔗糖+5.0-6.0gL琼脂pH5.4-5.8,所述继代培养基为MS+2.0-3.0mgL6-BA+0.2-0.3mgLTDZ+20-30gL蔗糖+5.0-6.0gL琼脂pH5.4-5.8; S2、农杆菌侵染:将待转化的农杆菌培养至菌液OD600值达到0.6-0.8时,离心收集菌体,将菌体与侵染液混合,黑暗条件下室温静置2-3h后,加入150-250μmol·L-1的AS备用;将步骤S1制备的愈伤组织切成0.5-1.0cm3小块,倒入菌体与侵染液混合物至完全浸没,80-120rpm侵染10-40min; S3、共培养:将侵染后的朱顶红愈伤组织取出风干后接种于共培养培养基中,暗培养3-7d,所述共培养培养基为MS+2.0-3.0mgL6-BA+0.2-0.3mgLTDZ+20-30gL蔗糖+5.0-6.0gL琼脂pH5.4-5.8; S4、抗性愈伤组织筛选:共培养后将愈伤组织置于含有400-600mgLCef的无菌水中震荡脱菌,再用无菌水震荡冲洗,干燥后接种到筛选培养基中培养,愈伤组织长出再生植株后进行转基因植株检测,所述筛选培养基为MS+1.0-1.5mgLIAA+0.1-0.2mgL6-BA+0.2-0.3mgLTDZ+0-500mgLCarb+400-600mgLCef+20-30gL蔗糖+5.0-6.0gL琼脂pH5.4-5.8。
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