合肥工业大学张华获国家专利权
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龙图腾网获悉合肥工业大学申请的专利一种提高番茄植株抗旱的基因及其方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119120490B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-17发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410988083.3,技术领域涉及:C12N15/29;该发明授权一种提高番茄植株抗旱的基因及其方法是由张华;刘战民;孙瀛;曾德新;胡康棣;姚改芳;张敏;耿美慧设计研发完成,并于2024-07-23向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种提高番茄植株抗旱的基因及其方法在说明书摘要公布了:一种提高番茄植株抗旱的基因及其方法,所述基因的核苷酸序列如图SeqNo.1所示。本发明通过从番茄中获得SlERF.D2基因完整的编码序列,设计靶点,将靶点连接到载体CRISPR‑Cas9上,利用农杆菌侵染法转化植物,获得基因编辑植株,对基因编辑植株进行了分析,结果表明该基因编辑后能够提高番茄植株抗旱性。
本发明授权一种提高番茄植株抗旱的基因及其方法在权利要求书中公布了:1.一种提高番茄植株抗旱性的方法,其特征在于:包括下列步骤: 步骤1:gRNA靶点接头引物的制备; 步骤2:gRNA表达盒构建:配制包含步骤1中靶点接头引物的酶切连接反应液,采用边切边连法使靶点接头与gRNA表达盒连接,扩展gRNA表达盒; 步骤3:以步骤2的产物为模板,进行第一轮PCR扩增;再以第一轮PCR产物为模板进行第二轮PCR扩增,利用琼脂糖凝胶电泳检测产物浓度,随后对第二轮PCR产物使用DNA纯化试剂盒进行纯化回收,获得纯化产物; 步骤4:采用边切边连的方法对步骤3的纯化产物与CRISPR-Cas9质粒进行连接,获得连接好的质粒; 步骤5:将步骤4连接好的质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,获得阳性单克隆菌落; 步骤6:挑取步骤5获得的阳性单克隆菌落进行PCR鉴定,如果正确,则提取质粒获得SlERF.D2-CRISPR-Cas9质粒; 步骤7:将SlERF.D2-CRISPR-Cas9质粒转化EHA105农杆菌感受态细胞,获得构建好的SlERF.D2-CRISPR-CAS9载体的农杆菌单菌落; 步骤8:将构建好的SlERF.D2-CRISPR-Cas9载体的农杆菌单菌落对番茄进行遗传转化; gRNA靶点引物接头的制备包括:先将靶点一正向引物-F1、靶点一反向引物-R1、靶点二正向引物-F2和靶点二反向引物-R2分别配置得到100µM的母液,再分别将靶点一正向引物-F1母液和靶点一反向引物-R1母液混合稀释到1µM得到第一混合引物,靶点二正向引物-F2母液和靶点二反向引物-R2母液混合稀释到1µM得到第二混合引物;90℃,30s,随后转移至室温冷却完成退火; 靶点一正向引物-F1:5’-gtcaTACACGTGTGGTATCGGGTC-3’; 靶点一反向引物-R1:5’-aaacGACCCGATACCACACGTGTA-3’; 靶点二正向引物-F2:5’-gtcaGGTGTACGACAACGACCAT-3’; 靶点二反向引物-R2:5’-aaacATGGTCGTTGTCGTACACC-3’。
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