中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所马学军获国家专利权
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龙图腾网获悉中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所申请的专利一种检测血液病毒的RT-RAP引物探针组及试剂盒获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116004923B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-17发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310040246.0,技术领域涉及:C12Q1/70;该发明授权一种检测血液病毒的RT-RAP引物探针组及试剂盒是由马学军;申辛欣;田丰雨设计研发完成,并于2023-01-13向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种检测血液病毒的RT-RAP引物探针组及试剂盒在说明书摘要公布了:本发明提供一种检测血液病毒的RT‑RAP引物探针组及试剂盒,属于分子生物学技术领域。本发明所述引物探针组包括乙型肝炎病毒检测用引物探针组和或丙型肝炎病毒检测用引物探针组和或人类免疫缺陷病毒检测用引物探针组。本发明依次采用RT‑RAA和qPCR的检测手段,结合上述特异性引物探针组可同时快速检测乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒,灵敏度比普通qPCR高,反应时间大大缩短,且特异性好。
本发明授权一种检测血液病毒的RT-RAP引物探针组及试剂盒在权利要求书中公布了:1.一种非疾病诊断目的的检测血液病毒的RT-RAP方法,其特征在于,包括如下步骤: 1提取待测样品的核酸; 2以所述核酸为模板,采用RT-RAP引物探针组依次进行RT-RAA扩增和qPCR扩增,收集荧光信号;所述RT-RAA扩增和qPCR扩增的体系采用正二十二烷进行间隔; 3若乙型肝炎病毒对应的扩增曲线起峰且呈S型扩增,则判定待测样品中含有对应的乙型肝炎病毒;若丙型肝炎病毒对应的扩增曲线起峰且呈S型扩增,则判定待测样品中含有对应的丙型肝炎病毒;若人类免疫缺陷病毒对应的扩增曲线起峰且呈S型扩增,则判定待测样品中含有对应的人类免疫缺陷病毒; 所述RT-RAP引物探针组包括乙型肝炎病毒检测用引物探针组、丙型肝炎病毒检测用引物探针组和人类免疫缺陷病毒检测用引物探针组; 所述乙型肝炎病毒检测用引物探针组包括:HBV-RAA-F、HBV-RAA-R、HBV-PCR-F、HBV-PCR-R和HBV-P; 所述HBV-RAA-F、HBV-RAA-R、HBV-PCR-F、HBV-PCR-R和HBV-P的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1~SEQIDNO.5所示; 所述丙型肝炎病毒检测用引物探针组包括:HCV-RAA-F、HCV-RAA-R、HCV-PCR-F、HCV-PCR-R和HCV-P; 所述HCV-RAA-F、HCV-RAA-R、HCV-PCR-F、HCV-PCR-R和HCV-P的核苷酸序列分别如SEQIDNO.6~SEQIDNO.10所示; 所述人类免疫缺陷病毒检测用引物探针组包括:HIV-RAA-F1、HIV-RAA-R1、HIV-PCR-F1、HIV-PCR-R1、HIV-P1、HIV-RAA-F2、HIV-RAA-R2、HIV-PCR-F2、HIV-PCR-R2和HIV-P2; 所述HIV-RAA-F1、HIV-RAA-R1、HIV-PCR-F1、HIV-PCR-R1、HIV-P1、HIV-RAA-F2、HIV-RAA-R2、HIV-PCR-F2、HIV-PCR-R2和HIV-P2的核苷酸序列分别如SEQIDNO.11~SEQIDNO.20所示; 所述HBV-P、HCV-P、HIV-P1和HIV-P2分别标记不同的荧光基团; 所述RT-RAA扩增的反应体系包括280mM乙酸镁、模板和RT-RAA反应混合液;所述乙酸镁、模板和RT-RAA反应混合液的体积比为0.2~0.8:0.5~1.5:6~12; 所述RT-RAA扩增和qPCR扩增的体系采用正二十二烷进行间隔,包括:在qPCR扩增体系中加入熔融的正二十二烷进行静置,正二十二烷浮于qPCR扩增体系之上,待正二十二烷凝固后,在凝固的正二十二烷上加入RT-RAA扩增体系; 所述RT-RAA扩增和qPCR扩增于带盖的管内进行;在凝固的正二十二烷上加入RT-RAA扩增体系包括如下步骤:将除乙酸镁以外的RT-RAA扩增体系加入到凝固的正十二烷之上,将乙酸镁加到盖内,利用乙酸镁启动RT-RAA反应。
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