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中国热带农业科学院三亚研究院;中国热带农业科学院椰子研究所张大鹏获国家专利权

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龙图腾网获悉中国热带农业科学院三亚研究院;中国热带农业科学院椰子研究所申请的专利醋酸锂-聚乙二醇介导的原生质体脂质纳米颗粒递送方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119242716B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-14发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411754933.X,技术领域涉及:C12N15/88;该发明授权醋酸锂-聚乙二醇介导的原生质体脂质纳米颗粒递送方法是由张大鹏;王永;石鹏;李志瑛;尹敏慧;于群;何香满设计研发完成,并于2024-12-03向国家知识产权局提交的专利申请。

醋酸锂-聚乙二醇介导的原生质体脂质纳米颗粒递送方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种醋酸锂‑聚乙二醇介导的原生质体脂质纳米颗粒递送方法,属于生物技术领域。本发明首次通过在原生质体转化液MMG中添加LiAc,并通过提高钙离子Ca2+浓度改良PEG配方,成功向油棕、椰子等棕榈作物原生质体中递送了脂质纳米颗粒LNP,该型纳米颗粒中包裹增强型绿色荧光蛋白eGFP的mRNA,可不需启动子直接在原生质体内以mRNA为模板表达荧光蛋白。利用本方法将LNP递送至棕榈作物原生质体后经激光共聚焦显微镜观察检测到了绿色荧光信号。该方法可用于直接向棕榈作物原生质体内递送目标基因mRNA,也可递送CRISPRCas系统蛋白等用于基因编辑技术研究。

本发明授权醋酸锂-聚乙二醇介导的原生质体脂质纳米颗粒递送方法在权利要求书中公布了:1.醋酸锂-聚乙二醇4000介导的脂质纳米颗粒递送方法在原生质体转化中的应用,所述原生质体为棕榈作物的原生质体;所述递送方法包括以下步骤: 取棕榈作物无菌苗幼叶分离原生质体并纯化;纯化后的原生质体用含醋酸锂的MMG溶液调整浓度至2×105个mL; 先取40μL浓度为0.15mgmL的脂质纳米颗粒溶液加入到新的2mL圆底离心管中,然后再加入调整好浓度的100μL原生质体溶液并混匀; 向该溶液中加入140μL新配置的含Ca2+的聚乙二醇4000溶液,混匀后在28℃条件下静置30min;加入1mL的W5培养液终止转化反应,150g离心3min,离心机升速、降速均为3;再用1mL的W5培养液洗涤一次、离心去上清,最后加入1mL的W5培养液将离心管平放至28℃条件下暗培养16h;缓慢提起离心管先静止30min,然后在150g、升速3、降速3条件下离心3min,去上清,保留100μL培养液与原生质体混匀,用共聚焦显微镜或荧光显微镜进行观测; 上述含醋酸锂的MMG溶液是含有0.78~1mgmL的MES、72.86~100mgmL的D-Mannitol、3.04~10mgmL的MgCl2·6H2O、10.20~20mgmL的LiAc·2H2O的溶液,用KOH调节pH值至5.7~6.03后,过滤除菌制备得到; 含Ca2+的聚乙二醇4000溶液配制方法为: 首先分别配制0.8M的D-Mannitol和2M的CaCl2的储备液;称取4g的聚乙二醇4000溶于5mL超纯水中,加入浓度为0.8M的D-Mannitol的储备液2.5mL,加入浓度为2M的CaCl2的储备液2mL,然后在55℃水浴10min助溶,期间上下颠倒混匀几次,最后定容至10mL,即为含有400mMCa2+的聚乙二醇4000转化液; 所述的脂质纳米颗粒是包裹增强型绿色荧光蛋白eGFPmRNA的脂质纳米颗粒。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人中国热带农业科学院三亚研究院;中国热带农业科学院椰子研究所,其通讯地址为:572025 海南省三亚市崖州区创意产业标准厂房二期三楼235区;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

以上内容由龙图腾AI智能生成。

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