华东理工大学储炬获国家专利权
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龙图腾网获悉华东理工大学申请的专利一种提高HEK293悬浮细胞瞬时转染效率的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116694682B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-14发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310650964.X,技术领域涉及:C12N15/85;该发明授权一种提高HEK293悬浮细胞瞬时转染效率的方法是由储炬;桂宇茜设计研发完成,并于2023-06-02向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种提高HEK293悬浮细胞瞬时转染效率的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种提高HEK293悬浮细胞瞬时转染效率的方法,包括以下步骤:1菌种活化:挑取保藏于‑80℃低温冰箱中的大肠杆菌菌株接种到经无菌处理的固体培养基斜面上,37℃培养过夜培养进行菌种活化;2大肠杆菌5α摇瓶培养:从所述斜面上挑取菌落接入液体培养基中,220rpm,37℃过夜培养;3质粒的提取:取步骤2中的大肠杆菌离心,使用无内毒素质粒大提试剂盒进行质粒的提取,提取后的质粒用测出质粒浓度和纯度。本实验使用的HEK293悬浮细胞有生长速度快、细胞活力强、易于控制、实验周期短操作简单,实验重复性好。
本发明授权一种提高HEK293悬浮细胞瞬时转染效率的方法在权利要求书中公布了:1.一种将质粒瞬时转入HEK293细胞中表达蛋白的方法,其特征在于,包括以下步骤: 1菌种活化 挑取保藏于-80℃低温冰箱中的大肠杆菌菌株接种到经无菌处理的固体培养基斜面上,37℃培养过夜培养进行菌种活化; 2大肠杆菌DH5α摇瓶培养 从所述斜面上挑取菌落接入液体培养基中,220rpm,37℃过夜培养; 3质粒的提取 取步骤2中的大肠杆菌离心,使用无内毒素质粒大提试剂盒进行质粒的提取,提取后的质粒用测出质粒浓度和纯度; HEK293细胞瞬时转染方法,包括以下步骤: a先将脂质复合物PEI与从上述提取的质粒在含有的培养基里进行孵育25-30min,得到PEIDNA复合物; b将上述转染复合物PEIDNA缓慢滴加到HEK293细胞中,120rpm,37℃,5%CO2的条件下悬浮培养; c细胞转染24h后,进行补料:5%FM01A+0.5%FM01B,保证糖的含量为8gL,残糖含量不低于2gL; 所述步骤a中孵育培养基为含有10mgL的CaCl2的上海宥艺培养基CD01; 所述步骤b中转染时的细胞密度为4×106cellsmL; 所述步骤a中转染时DNA含量为1.5mgL,PEIDNA比例为3。
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