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中国科学院大连化学物理研究所秦建华获国家专利权

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龙图腾网获悉中国科学院大连化学物理研究所申请的专利一种基于单细胞芯片的类器官的制备方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116144574B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-14发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211600437.X,技术领域涉及:C12N5/00;该发明授权一种基于单细胞芯片的类器官的制备方法是由秦建华;刘海涛;甘忠桥设计研发完成,并于2022-12-12向国家知识产权局提交的专利申请。

一种基于单细胞芯片的类器官的制备方法在说明书摘要公布了:本发明提供一种基于单细胞芯片的类器官的制备方法,包括微流控芯片制备、双水相溶液准备、单细胞悬液准备、微流体操控、单细胞负载微凝胶产生和类器官构建等。本发明以集成常闭气动泵阀的微流控芯片为技术平台,以预先经交联剂孵育的单细胞悬液为化学反应核心,以水包水液滴为成型模板,通过一步法将单分散种子细胞负载于微型水凝胶载体中,并在后续转移步骤中简单地去除不含细胞的空载液滴,实现高效的单细胞原位负载。微凝胶中单细胞可经过正常培养、扩增和自组织形成所需类器官。本发明提高了类器官起点一致性,具备液滴微流控技术高通量特点,实现了高效、高重现性的类器官体外构建,可在类器官相关的基础研究和转化应用等领域发挥巨大作用。

本发明授权一种基于单细胞芯片的类器官的制备方法在权利要求书中公布了:1.一种基于单细胞芯片的类器官的制备方法,其特征在于,以集成了常闭气动泵阀的微流控芯片为技术平台,以预先经交联剂孵育的单细胞悬液为化学反应核心,以水包水液滴为成型模板,通过一步法将单分散的种子细胞负载于微型水凝胶载体中,并在后续转移步骤中简单地去除不含细胞的空载液滴,实现高效的单细胞原位负载;包括如下步骤: S1、微流控芯片的制备:利用软光刻技术制备集成有常闭气动泵阀8的聚二甲基硅氧烷芯片,即微流控芯片,该芯片用于生成双水相液滴模板和制备负载单细胞的水凝胶微球;所述芯片包括上下两层,分别为上层的液路部分和下层的气路部分,其中气路部分通过常闭气动泵阀8抽气与静息两种状态周期性开放散相通道,从而使分散相间断性地进入连续相中,稳定高效地形成双水相液滴; S2、双水相溶液的准备:分别制备含交联剂的反应相、连续相和分散相,将可经高价金属阳离子交联的高分子溶于葡聚糖等渗液作为分散相;在酸溶液中溶解聚乙二醇作为含交联剂的反应相,以聚乙二醇等渗溶液为连续相; S3、单细胞悬液的准备:制备单细胞悬液,并将单细胞悬液按一定浓度重悬于步骤S2制备的分散相中,得到含有细胞的分散相溶液; S4、微流体的操控:将含交联剂的反应相、连续相以及含细胞的分散相输送至微流控芯片中,并利用常闭气动泵阀8获得含细胞的分散相液滴; S5、单细胞负载微凝胶的产生:在微流控芯片中使步骤S4中形成的含细胞的分散相液滴与含有交联剂的反应相相遇并进行反应,形成负载细胞的微凝胶; S6、类器官的构建:将步骤S5中得到的单细胞负载微凝胶转移至相应细胞培养基中,并在37℃、5%CO2的细胞培养环境或低氧环境下进行长期培养与扩增,从而由单细胞发育为单克隆并最终形成类器官; 所述步骤S3的具体步骤如下: 将二维贴壁或三维培养的细胞经酶解消化后得到单分散的细胞悬液,之后将预先经超声分散的含金属氧化物或盐纳米颗粒的等渗液与细胞悬液充分混匀,于常温或37℃条件下孵育,随后经离心或过滤操作将未粘连在细胞表面的纳米颗粒去除,得到表面粘附纳米颗粒的单细胞悬液;将单细胞悬液按一定浓度重悬于分散相中,得到含有细胞的分散相溶液; 所述步骤S5的具体步骤如下: 步骤S4中形成的含细胞的分散相液滴与含有交联剂的反应相在芯片的交叉口B13处相遇,处于反应相中的氢离子由于自由扩散运动,穿过中间的连续相而进入液滴,并瞬间与细胞表面粘附的纳米颗粒相互作用,释放出高价金属离子,从而使分散相中的高分子发生交联,形成负载细胞的微凝胶;而不含细胞的液滴,由于其中没有金属离子的释放,无法交联,可在后续的收集和转移过程中自然溶解于周围溶液中; 纳米颗粒的种类为:碳酸钙、碳酸钡、氧化铁、氧化锌、氧化铜中的一种。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人中国科学院大连化学物理研究所,其通讯地址为:116000 辽宁省大连市沙河口区中山路457号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

以上内容由龙图腾AI智能生成。

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