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龙图腾网获悉湖南工程学院申请的专利一种利用基因组合转化制备稀有人参皂苷CK的方法及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN112481280B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-10-14发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202011436238.0，技术领域涉及：C12N15/56；该发明授权一种利用基因组合转化制备稀有人参皂苷CK的方法及应用是由张儒;谭时泉;张变玲设计研发完成，并于2020-12-10向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种利用基因组合转化制备稀有人参皂苷CK的方法及应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种利用基因组合转化制备稀有人参皂苷CK的方法及应用。本发明利用枯草芽孢杆菌Bacillussubtilisstr.168和双歧杆菌Bifidobacteriumbreve689b的基因所产生的糖苷酶在体外能够高效率转化人参皂苷Rc为稀有人参皂苷CK。

本发明授权一种利用基因组合转化制备稀有人参皂苷CK的方法及应用在权利要求书中公布了：1.一种利用基因组合转化制备稀有人参皂苷CK的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： 1将来自于枯草杆菌Bacillussubtilisstr.168的α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶基因BsAbfA进行密码子优化，得BsAbfA-op基因；将来自于双歧杆菌Bifidobacteriumbreve689b的β-葡萄糖苷酶基因BbBgl2进行密码子优化，得BbBgl2-op基因；并在BsAbfA-op基因和BbBgl2-op基因之间插入IRBS序列；其中，所述BsAbfA基因序列如SEQIDNO.1所示，所述BsAbfA-op基因序列如SEQIDNO.2所示，所述BbBgl2基因序列如SEQIDNO.3所示，所述BbBgl2-op基因序列如SEQIDNO.4所示，所述IRBS序列如SEQIDNO.5所示； 2将在BsAbfA-op基因和BbBgl2-op基因之间插入IRBS序列后的基因序列连接至pET28a载体的BamHI和EcoRI酶切位点之间，获得含有BsAbfA-op和BbBgl2-op基因的重组表达载体，命名为pET-BsAbfA-BbBgl2-op，所述重组表达载体pET-BsAbfA-BbBgl2-op的基因序列如SEQIDNO.6所示；所述BsAbfA-op和BbBgl2-op基因依次位于pET28a载体的T7启动子下游； 3将重组表达载体pET-BsAbfA-BbBgl2-op转化至大肠杆菌BL21，然后通过卡那霉素筛选、PCR和测序检测，制备成含BsAbfA-op和BbBgl2-op基因的重组菌； 4将步骤3所得的重组菌37℃培养至OD600为0.4-0.6时，以0.1-1.0mmolL的IPTG诱导2-10小时，离心后再加入新鲜的LB培养基配制成重组菌液； 5将人参皂苷Rc溶解于甲醇中，与pH4.0-6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液混合，配制成浓度为1-50gL的人参皂苷Rc底物溶液，然后将人参皂苷Rc底物溶液与IPTG诱导后的重组菌液按照体积比1:1-10混合，于pH5，40℃条件下反应24小时，置于70-80℃水浴中灭活10-20min后，于室温条件下离心10-15min，取上清液，得到稀有人参皂苷CK。

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