武汉艾迪晶生物科技有限公司王高华获国家专利权
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龙图腾网获悉武汉艾迪晶生物科技有限公司申请的专利用于水稻基因编辑的MAD7-NLS融合蛋白、载体及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116103266B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-30发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211695732.8,技术领域涉及:C12N9/22;该发明授权用于水稻基因编辑的MAD7-NLS融合蛋白、载体及其应用是由王高华;邹洪锋;段芳;谢先荣;刘伟智设计研发完成,并于2022-12-28向国家知识产权局提交的专利申请。
本用于水稻基因编辑的MAD7-NLS融合蛋白、载体及其应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种用于水稻基因编辑的MAD7‑NLS融合蛋白、载体及其应用,MAD7蛋白的N端增加1个核定位信号肽氨基酸序列,在C端增加1个核定位信号肽氨基酸序列,得到MAD7‑NLS融合蛋白。MAD7‑NLS融合蛋白的CrRNA表达盒子包括基因编辑靶点、启动子和MAD7蛋白的两种CrRNA序列,分别为35nt‑CrRNA和21nt‑CrRNA,CrRNA的核苷酸序列3’端分连接有1个tRNA序列。在水稻遗传转化筛选阶段42℃处理4h水稻愈伤组织能够显著的提高MAD7核酸酶的基因编辑效率,MAD7突变类型多数为6‑50nt的删除。完整表达载体含有上述CrRNA表达盒子和MAD7‑NLS融合蛋白的核苷酸序列,上述表达载体能够高效实现水稻基因的敲除编辑。
本发明授权用于水稻基因编辑的MAD7-NLS融合蛋白、载体及其应用在权利要求书中公布了:1.一种用于水稻基因编辑的MAD7‑NLS融合蛋白完整表达载体,其特征在于,包括MAD7‑NLS融合蛋白表达载体空载,还包括CrRNA表达盒子; 所述MAD7‑NLS融合蛋白表达载体空载是在空白载体上连接有MAD7‑NLS融合蛋白的核苷酸序列,还含有CCDB序列;所述MAD7‑NLS融合蛋白是在MAD7核酸酶的N端增加1个SV40核定位信号肽,在C端增加1个nucleoplasmin核定位信号肽;所述MAD7核酸酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;所述MAD7核酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示,所述MAD7‑NLS融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示; 所述CrRNA表达盒子包括CrRNA表达盒空载和针对特定水稻基因设计的基因编辑靶点; 所述CrRNA表达盒空载包括用于所述MAD7‑NLS融合蛋白表达的35nt‑CrRNA或者21nt‑CrRNA,还包括针对转录特定水稻基因编辑靶点的启动子;所述35nt‑CrRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示,所述21nt‑CrRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示;所述基因编辑靶点为cttctagaagcacaagcgccgctcg,PAM位点为cttc,靶点序列为tagaagcacaagcgccgctcg。
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