山东理工大学唐峰获国家专利权
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龙图腾网获悉山东理工大学申请的专利一种心肌肌钙蛋白I的夹心型电化学免疫传感器的制备获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116858915B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-26发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310875824.2,技术领域涉及:G01N27/327;该发明授权一种心肌肌钙蛋白I的夹心型电化学免疫传感器的制备是由唐峰;王双娜;李月云;王淑君;邢朔;李悦源;刘青;王平设计研发完成,并于2023-07-18向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种心肌肌钙蛋白I的夹心型电化学免疫传感器的制备在说明书摘要公布了:本发明属于新型纳米复合材料、免疫分析和生物传感技术领域,提供了一种心肌肌钙蛋白I的夹心型电化学免疫传感器的制备方法。本发明以具有高导电性的负载金颗粒的多级孔结构氮掺杂碳纳米管AuNPsN‑CNTs为基底材料,以介孔钯氮纳米立方体meso‑PdNNCs作为电化学信号放大平台,实现了对心肌肌钙蛋白ICTnI抗原的定量检测,具有特异性强,灵敏度高,检测限低等优点,对急性心肌梗塞AMI的检测具有重要的科学意义和应用价值。
本发明授权一种心肌肌钙蛋白I的夹心型电化学免疫传感器的制备在权利要求书中公布了:1.一种心肌肌钙蛋白I的夹心型电化学免疫传感器的制备方法,其特征在于:包括如下步骤: 1将直径为4.0mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉抛光成镜面,在无水乙醇中超声清洗干净; 2将6.0μL、0.5~1.5mgmL的AuNPsN-CNTs分散液滴加到电极表面,超纯水冲洗,室温下晾干; 3将6.0μL、5~15μgmL的心肌肌钙蛋白IcTnI抗体滴加到电极表面,pH=7.17磷酸盐缓冲液冲洗电极表面,4℃冰箱中干燥; 4继续将3.0μL、1wt%的牛血清蛋白溶液滴加到电极表面,用以封闭电极表面上非特异性活性位点,pH=7.17磷酸盐缓冲液冲洗电极表面,4℃冰箱中晾干; 5继续滴加6.0μL、10fgmL~100ngmL的一系列不同浓度的心肌肌钙蛋白IcTnI抗原溶液,用pH=7.17磷酸盐缓冲液冲洗,4℃冰箱中干燥; 6将6.0μL、2.0~4.0mgmL的meso-PdNNCs-Ab2分散液滴涂于电极表面,在4℃冰箱中静置40min,用pH=7.17的磷酸盐缓冲液冲洗,4℃干燥,制得一种心肌肌钙蛋白I的夹心型化学免疫传感器; 其中步骤1所述的AuNPsN-CNTs的制备具体如下: ①N-CNTs的制备 将340.0~360.0mg埃洛石分散在240~260mL10mMpH=8.5Tris-HCl缓冲液中并超声处理30分钟;之后,向上述分散液中加入220.0~240.0mg多巴胺盐酸盐并超声处理5分钟,然后在室温下搅拌22小时;离心并用水和甲醇重复洗涤后,70℃烘箱过夜,获得聚多巴胺包裹的埃洛石;在氩气氛围中将产品放在管式炉内加热,5℃min升温至800℃,恒温热解4小时,随后分别用14~16mL6MHCl和14~16mL12MHF连续搅拌脱盐12小时,并用水-乙醇彻底洗涤至中性,冻干;得到最终产物N-CNTs; ②AuNPs的制备 将0.5~1.5mLHAuCl4·4H2O添加到装有98.5~99.5mL超纯水的圆底烧瓶中,将电磁转子放入烧瓶中,以一定速度搅拌,加热至沸腾,然后,将2.0~3.0mL柠檬酸钠添加到烧瓶中,并保持沸腾15分钟,获得均匀的金纳米颗粒; ③AuNPsN-CNTs的制备 采用原位还原法在N-CNTs上负载AuNPs;将4~6mgN-CNTs分散到2.68~4.68mL二次去离子水中,边搅拌边加入0.05~0.15mL10mM柠檬酸钠,0.05~0.15mL10mM氯金酸,随后迅速加入新鲜制备的0.06~0.18mL0.1M冷硼氢化钠,室温下搅拌20h,离心冻干;步骤6所述的meso-PdNNCs-Ab2的制备具体如下: ①PdNNCs的制备 以十六烷基三甲基氯化铵CTAC为结构导向表面活性剂,Na2PdCl4为金属前驱体,L-抗坏血酸AA为还原剂,H2O为溶剂,在50℃下,采用一锅溶液相法合成了PdNCs;将0.30~0.35mgCTAC溶解在4.0~6.0mL二次去离子水中,加入0.075~0.125mL200mMHCl调节反应溶液的pH;依次向上述溶液中加入0.20~0.28mL80mMKCl和0.20~0.30mL10mMNa2PdCl4溶液,并在50℃下保持30min;在轻轻摇动下,将0.40~0.60mL0.30M新制备的AA快速注入上述溶液中;反应1.0小时后,通过离心水洗3次后冻干收集产物; ②meso-PdNNCs的制备 将0.8~1.2mL合成的PdNCs、45~55mg尿素和45~55mg聚乙烯吡咯烷酮PVP与3.5~4.5mL去离子水混合;超声后,将所得溶液转移至容量为20mL的反应釜中;将高压釜加热至180℃保持1.5小时,然后冷却至室温;为了去除meso-PdNNCs上的表面活性剂,最后用乙酸清洗三次,用乙醇水清洗三次后冻干收集产物; ③meso-PdNNCs-Ab2的制备 将0.8~1.2mLmeso-PdNNCs和0.8~1.2mLAb2溶液通过震荡仪在4℃震荡过夜;使用磷酸盐缓冲液溶液PBS作为分散溶液将所得产物离心数次,洗去未结合的Ab2,然后重新分散在PBS中,并在4℃储存在冰箱中。
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