陕西省中医药研究院;陕西省中医医院张红获国家专利权
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龙图腾网获悉陕西省中医药研究院;陕西省中医医院申请的专利一种清瘟护肺颗粒的超高效液相色谱-质谱检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115950972B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-23发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211478410.8,技术领域涉及:G01N30/02;该发明授权一种清瘟护肺颗粒的超高效液相色谱-质谱检测方法是由张红;龙凯花;杜霞;李晔;刘静;曹利平设计研发完成,并于2022-11-23向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种清瘟护肺颗粒的超高效液相色谱-质谱检测方法在说明书摘要公布了:本发明提供一种清瘟护肺颗粒的超高效液相‑质谱检测方法,本发明采用超高效液相色谱‑四级杆静电场轨道阱高分辨质谱法UHPLC‑QExactiveFocusMSMS技术,经对照品比对确认,本发明检测方法共鉴定出清瘟护肺颗粒中解析出的萜类化合物有17个包括断氧化马钱子苷、断马钱子酸等成分、苯丙素类化合物有28个1‑O‑咖啡酰奎宁酸、绿原酸、5‑对香豆酰奎宁酸、3‑O‑咖啡酰奎宁酸甲酯、罗汉松脂素、1,3‑O‑二咖啡酰奎宁酸等成分、色原酮类8个亥茅酚、总黄酮类29个包括金丝桃苷和芦丁等成分、有机酸类化合物有18个咖啡酸等成分、苷类化合物有36个、其他类化合物有23个,本发明检测方法对清瘟护肺颗粒中的中药化学成分进行快速在线分离与鉴定,为其药效物质基础、质量控制及作用机制研究提供科学依据。
本发明授权一种清瘟护肺颗粒的超高效液相色谱-质谱检测方法在权利要求书中公布了:1.一种清瘟护肺颗粒的超高效液相色谱-质谱检测方法,其特征在于,所述检测方法包括以下步骤: ⑴、色谱条件:C18色谱柱,柱温30~40℃,流速设定0.1~0.5mL·min-1,流动相:甲醇A-0.1%甲酸水溶液B,0~3min,1%A;3~20min,1%~35%A;20~33min,35%~80%A;33~35min,80%A;35~44min,80%~98%A;44~46min,98%A; ⑵、质谱条件为:离子源为加热电喷雾离子源HESI,采用正、负离子监测模式,以正离子模式喷雾电压为3~4kV,负离子模式喷雾电压为2~4kV,鞘气体积流量正、负离子模式均为30~50个流量单位,辅助气流量正、负离子模式均为8~12个流量单位,毛细管温度正、负离子模式均为310~330℃,雾化温度330~370℃,最大喷射电流正、负离子模式均为80~120A,S-lensRFlevel为40~60,扫描模式FullMSdd-MS2,FullMS分辨率6~8万,离子源为HESI,dd-MS2分辨率16000~18000,扫描范围mz60~1500;碰撞能量CE设定20~40eV; ⑶、样品溶液的制备:取清瘟护肺颗粒,精密称定,加60%~80%甲醇,超声时间20~40min,放至室温,用60%~80%甲醇补足失重,滤过,取续滤液即得; ⑷、对照品溶液的制备:称取对照品,加甲醇溶解并定容,制备绿原酸、甘草苷、滨蒿内酯、5-O-甲基维斯阿米醇苷、哈巴苷、连翘酯苷A、木犀草苷、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、连翘苷、哈巴俄苷、升麻素苷质量浓度分别为0.1~0.15mg·mL-1、0.6~1.0mg·mL-1、0.08~0.13mg·mL-1、0.10~0.16mg·mL-1、0.13~0.17mg·mL-1、0.12~0.16mg·mL-1、0.14~0.18mg·mL-1、0.16~0.21mg·mL-1、0.13~0.17mg·mL-1、0.17~0.21mg·mL-1、0.19~0.23mg·mL-1的对照品储备液; ⑸、文献库的建立:查阅CNKI、PubMed、WebofScience数据库,检索清瘟护肺颗粒组方药材金银花、连翘、浙贝母、大青叶、淡竹叶、桔梗、党参、炒白术、茯苓、玄参、麦冬、苦杏仁、茵陈、防风、紫苏叶和甘草的化学成分研究文献,结合文献报道和ChemicalBook数据库信息,汇总所含化学成分的中文名称、英文名称、类别、参考文献及结构鉴定信息,包括分子式、相对分子质量、mol格式的结构式、一级、多级质谱信息,建立清瘟护肺颗粒全药材化学成分库; 6、化合物鉴定:根据液质检测结果,采用Xcalibur4.0软件拟合分子式,得到一级信息匹配的数据库,与自建的清瘟护肺颗粒全药材化学成分库进行重复性筛选,对筛选库根据二级分子信息推断裂解的碎片信息,无法匹配的碎片离子根据ChemSpider数据库中下载的.mol格式的结构式在赛默飞裂解软件中进行裂解及碎片离子分析,根据对照品、数据库、参考文献、赛默飞裂解软件提供的碎片离子信息进一步推测化合物的裂解规律。
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