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龙图腾网获悉上海茵创昕生物科技有限公司申请的专利一种用于检测剪接异构体的靶向高通量测序方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN118302538B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-19发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202480000814.7，技术领域涉及：C12Q1/6806；该发明授权一种用于检测剪接异构体的靶向高通量测序方法是由朱钧;白冰设计研发完成，并于2024-02-20向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种用于检测剪接异构体的靶向高通量测序方法在说明书摘要公布了：一种用于检测剪接异构体的靶向高通量测序方法，包括用于高通量测序的测序文库的建立方法，包括以下步骤：1采用逆转录引物对样本RNA进行逆转录，加入普通dNTP和3’修饰的dNTP，反应得到cDNA第一链；2通过点击化学反应将5’端带有炔基修饰的寡核苷酸片段与步骤1获得的cDNA片段连接；3以步骤2的反应产物为模板，PCR扩增；4获得测序文库。靶向富集引物可在逆转录或PCR扩增步骤中引入。富集步骤反应体系中含有多个基因特异性引物，且每个引物基于该转录本中选择性剪接事件的下游外显子区段设计，保证逆转录产生的随机长度片段覆盖剪接位点。

本发明授权一种用于检测剪接异构体的靶向高通量测序方法在权利要求书中公布了：1.一种用于高通量测序的测序文库的建立方法，其包括以下步骤： （1）采用逆转录引物对样本RNA进行逆转录，加入普通dNTP和3’修饰的dNTP，反应得到cDNA第一链，所述3’修饰的dNTP选自以下的一种或多种：AzNTP、AmNTP、propargyl-NTP、HalNTP； （2）通过点击化学反应将5’端带有炔基修饰的寡核苷酸片段与步骤（1）获得的cDNA片段连接，所述寡核苷酸片段包含通用测序引物1的互补区段序列； （3）以步骤（2）的反应产物为模板，采用通用测序引物1和基因特异性引物群2进行PCR反应扩增，靶向富集； （4）以步骤（3）的富集片段为模板，添加完整的P5P7接头和核酸条形码，获得测序文库； 所述步骤（1）中所述的逆转录引物是基于靶向基因的保留内含子下游外显子设计的基因特异性引物群1，所述基因特异性引物群1中的引物的5’端带有通用测序引物2序列； 所述基因特异性引物群2中的引物的5’端带有通用测序引物2序列； 所述基因特异性引物群2的靶向位点比基因特异性引物群1的位点向上游上移5-100个碱基。

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