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龙图腾网获悉中国科学院城市环境研究所申请的专利一种基于环境DNA技术检测湖库活体真核浮游生物的方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119715077B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-16发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411933445.5，技术领域涉及：G01N1/30；该发明授权一种基于环境DNA技术检测湖库活体真核浮游生物的方法及其应用是由杨军;厉舒祯;薛媛媛;陈辉煌设计研发完成，并于2024-12-26向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于环境DNA技术检测湖库活体真核浮游生物的方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种基于环境DNA技术检测湖库活体真核浮游生物的方法及其应用，涉及生物学、生态学和环境科学技术领域。本发明包括如下步骤：S1、确定采样位点；S2、水样采集；S3、样本过滤；S4、PMA处理；S5、样本存放。本发明将PMA染色处理用于真核浮游生物样本采集过程中，可得到环境中活体真核浮游生物信息，能够检测和区分总体与活体真核浮游生物种类和数量，提高检测效率，从而对水体不同水层中不同粒径浮游生物群落的多样性进行快速准确的量化。

本发明授权一种基于环境DNA技术检测湖库活体真核浮游生物的方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种基于环境DNA技术检测湖库活体真核浮游生物的方法，其特征在于，包括如下步骤： S1、确定采样位点： S1-1：根据水温在湖库水体垂直剖面上的变化速率，将水体分为湖上层、温跃层和湖下层； S1-2：若水体深度小于3m或不存在热分层时，采集表层0.5m处水体样本； S1-3：若水深为3-10m时，分别采集表层0.5m处水体和底层沉积物上方1-2m处水体样本； S1-4：若水深大于10m时，采集3-5个水层的样本，包括湖上层0.5m处水体、温跃层水层、湖下层的沉积物上方1-2m处水体样本，以及湖上层和湖下层的中间位置； S2、水样采集：明确采样位点后，进行各水层的水样采集，每个样点至少采集10L水样； S3、样本过滤： S3-1：使用200μm尼龙筛绢预过滤去除水体中大颗粒物质和大型浮游生物，使用孔径为3μm的聚碳酸酯滤膜过滤，完成过滤后取下滤膜并用铝箔纸包裹，放入灭菌后的2mL离心管保存，将这一步产生的过滤后水样进行收集； S3-2：使用孔径为0.22μm的聚碳酸酯滤膜过滤，完成过滤后取下滤膜并用铝箔纸包裹，放入灭菌后的2mL离心管保存； S3-3：每份样品过滤收集3-6份重复样本； S4、PMA处理：将收集的滤膜分为两部分，一部分滤膜采用PMA染色处理，将滤膜放入直径为5cm的培养皿中，均匀浸入500μL终浓度为50μgmL的PMA染料中黑暗处理20min，随后暴露于距离培养皿20cm处200W的LED灯下照射15min；另一部分未经PMA处理的滤膜也与经PMA处理的滤膜一起光照，最终得到非PMA和PMA的样品，非PMA即总DNA，PMA即活体生物DNA； S5、样本存放：光照结束后，将所有滤膜保存在-80℃超低温冰箱，用于后续DNA提取、PCR扩增和DNA测序。

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