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龙图腾网获悉中国水产科学研究院黄海水产研究所申请的专利一种利用分子测序技术分析南极磷虾胃肠道食物残留物的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120026092B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-16发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510501410.2，技术领域涉及：C12Q1/6806；该发明授权一种利用分子测序技术分析南极磷虾胃肠道食物残留物的方法是由刘璐;王新良;应一平;樊钢洲;牟秀霞;罗培铷;王俊方设计研发完成，并于2025-04-21向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种利用分子测序技术分析南极磷虾胃肠道食物残留物的方法在说明书摘要公布了：本发明涉及海洋生物学技术领域，具体涉及一种利用分子测序技术分析南极磷虾胃肠道食物残留物的方法，包括以下步骤：通过在低温环境下解剖南极磷虾并采用核酸提取试剂盒获取总DNA和总RNA，结合特异性引物设计实现目标基因扩增；随后进行条形码标记和高通量测序文库构建，以IlluminaNovaSeq平台进行双端测序并完成数据质控和去冗余处理，得到高质量序列数据，基于多级序列比对和最低共同祖先算法进行精确物种鉴定，并运用系统发育树及网络分析方法解析南极磷虾摄食残留物的多样性与营养级分布，通过环境DNA比对进一步溯源食物来源，本发明，可大幅提升物种鉴定的精度和范围，对于理解南极生态系统的能量流动与营养级结构具有重要意义。

本发明授权一种利用分子测序技术分析南极磷虾胃肠道食物残留物的方法在权利要求书中公布了：1.一种利用分子测序技术分析南极磷虾胃肠道食物残留物的方法，其特征在于，包括以下步骤： S1，样本采集与保存：从目标海域捕获南极磷虾个体，在低温环境下快速解剖，采集胃肠道内容物，并采用无核酸污染的保存试剂进行固定，所述S1包括： S11，活体捕获与预处理：在南极目标海域采用浮游生物网垂直拖网捕获南极磷虾活体样本，转移至预冷的保温箱中，运输至甲板实验室； S12，低温解剖环境构建：在洁净度等级ISO5级的超净工作台内铺设无菌冰床，并持续通入液氮蒸汽维持操作区域低温环境； S13，无菌解剖操作：使用经灭活处理的钛质解剖工具，沿南极磷虾背侧中线剖开头胸甲，完整剥离胃肠道组织并置于预冷的无菌培养皿中； S14，保存试剂渗透处理：将所述胃肠道组织浸入预冷的保存液中，并在震荡条件下使胃肠道内容物充分释放，得到胃肠道混合悬液； S15，固液分离与分装：将获得的胃肠道混合悬液通过尼龙滤膜过滤，获得过滤液，将所述过滤液分装至冻存管中，获取分装滤液样本； S16，梯度冷冻保存：将所述分装滤液样本依次置于-20℃环境中保存2小时，再转移至-80℃环境中保存12小时，最终置于液氮气相中进行长期存储； S17，元数据关联记录：采用二维码标签标记完成梯度冷冻保存的冻存管，并将样本采集位置、海水温度及磷虾体长信息写入区块链存证系统； S2，核酸提取与质量检测：利用核酸提取试剂盒从所述胃肠道内容物中提取总DNA和总RNA，并采用荧光定量法及凝胶电泳法检测所述总DNA和总RNA的纯度及完整性； S3，PCR扩增与测序文库构建：基于食物源的已知分类信息，设计特异性引物对所述总DNA和总RNA进行PCR扩增，以获得扩增序列，所述扩增序列包括细胞核基因和线粒体基因的目标区域； 在所述扩增序列中加入条形码标记以区分不同样本，并采用测序文库构建试剂对所述扩增序列进行适配子连接和片段化处理，构建高通量测序文库，并通过片段质量评估确保所述高通量测序文库的均一性； S4，高通量测序与数据质控：利用IlluminaNovaSeq高通量测序平台对所述高通量测序文库进行双端测序，以获得覆盖目标基因区域的测序数据； 对所述测序数据进行质控，包括去除低质量序列及适配子污染序列，并对质控后的测序数据进行去冗余处理，以获得有效测序数据； S5，序列比对与物种注释：采用比对工具和数据库对所述有效测序数据进行物种鉴定，并基于分类树分析构建胃肠道食物残留物的物种组成数据； 所述S5包括： S51，多级序列比对：将输出的有效测序数据与南极靶标基因库进行BLAST比对； S52，LCA分类分配：使用MEGAN6的最低共同祖先算法分配物种分类； S53，分类树构建：基于比对结果，采用RAxML构建最大似然系统发育树； S54，物种组成数据生成：整合分类结果与系统发育树拓扑结构，按分类层级统计Reads丰度，生成南极磷虾食物残留物物种组成矩阵； 基于所述物种组成数据，结合南极生态系统食物网模型，利用网络分析方法解析胃肠道食物残留物的营养级分布及食物来源多样性； S6，食物来源溯源：通过环境DNA比对分析，验证所述胃肠道食物残留物的物种组成数据的来源，并评估特定食物种群的生态贡献； 所述S6包括： S61，环境DNA序列匹配：将获得的有效测序数据与南极环境DNA污染数据库及生成的物种组成矩阵进行交叉比对； S62，地理溯源分析：基于S17区块链存证的采集位置信息，从SCAR-MarBIN地理数据库中提取对应海域的环境DNA参考数据，构建南极区域性环境DNA溯源数据库； S63，生态贡献度量化：采用线性混合模型评估目标食物种群的相对贡献率。

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