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龙图腾网获悉山东第一医科大学(山东省医学科学院)申请的专利一种3D软骨组织及其制备方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120366202B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-16发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510878598.2，技术领域涉及：C12N5/077；该发明授权一种3D软骨组织及其制备方法和应用是由韩金祥;崔亚洲;王京;栾静设计研发完成，并于2025-06-27向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种3D软骨组织及其制备方法和应用在说明书摘要公布了：本发明属于组织工程与再生医学领域，具体涉及一种3D软骨组织及其制备方法和应用。针对现有技术中间充质干细胞来源受限、诱导软骨易纤维化等问题，本发明通过转录因子转染结合多阶段小分子调控，将皮肤成纤维细胞重编程为软骨前体细胞，并利用动态3D培养系统优化软骨颗粒的形成与功能维持。实验证实，该方法诱导的软骨组织标志基因表达正常，COL10阴性，阿利新蓝染色与免疫组化验证其透明软骨特性，且体内修复实验显示显著疗效。本方案原料易得、成本可控，为软骨缺损修复及类器官研究提供了高效、稳定的技术平台。

本发明授权一种3D软骨组织及其制备方法和应用在权利要求书中公布了：1.一种3D软骨组织的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 将皮肤成纤维细胞进行消化，得到细胞沉淀； 将含有或能够激活OCT4、SOX2和KIF4的质粒转染至所述细胞沉淀，得到电转后的细胞悬液； 采用培养基B对电转后的细胞悬液进行培养，得到高致密度细胞； 分离出所述高致密度细胞中的高核质比细胞，进行培养传代，得到传代细胞； 采用培养基C对所述传代细胞进行培养，结束后转入3D培养容器，加入培养基D进行培养； 更换为培养基E，继续3D培养； 补充培养基D，培养得到3D软骨组织； 所述培养基B用于调控细胞基因表达和信号通路，助力细胞重编程以获得向软骨细胞分化的潜能； 所述培养基C用于引导已重编程的细胞向软骨细胞方向分化，使其逐渐具备软骨细胞特性； 所述培养基D用于促进细胞在3D环境下向软骨组织分化并形成软骨组织； 所述培养基E用于支持软骨组织的成熟和维持； 所述培养基B由以下组分组成：基础培养基DMEMF12，Insulin、抗坏血酸二磷酸、转铁蛋白、硒盐、TGF-β3、FGF2、Chir99021、PD0325901、A-83-01、pH调节剂、LDN-193189、FSK、VPA、BMP4、DZNeP、EPZ5676、RepSox、AM580和Brdu； 所述Insulin的终浓度为18~22μgmL； 所述抗坏血酸二磷酸的终浓度为180~220μgmL； 所述转铁蛋白的终浓度为18~22μgmL； 所述硒盐的终浓度为18~22ngmL； 所述TGF-β3的终浓度为1.8~2.2ngmL； 所述FGF2的终浓度为36~44ngmL； 所述Chir99021的终浓度为45~55nM； 所述PD0325901的终浓度为9~11nM； 所述A-83-01的终浓度为4.5~5.5nM； 所述LDN-193189的终浓度为4.5~5.5nM； 所述FSK的终浓度为9~11μM； 所述VPA的终浓度为0.09~0.11mM； 所述BMP4的终浓度为9~11ngmL； 所述DZNeP的终浓度为0.045~0.055μM； 所述EPZ5676的终浓度为4.5~5.5μM； 所述RepSox的终浓度为4.5~5.5μM； 所述AM580的终浓度为0.045~0.055μM； 所述Brdu的终浓度为9~11μM； 所述培养基C由以下组分组成：基础培养基DMEMKO，FBS、KSR、BMP4、Chir99021、FGF2、Wnt3A和GluMax； 所述FBS的终体积百分浓度为0.83~1.67%； 所述KSR的终体积百分浓度为1.67~3.33%； 所述BMP4的终浓度为10~20ngmL； 所述Chir99021的终浓度为10~30nM； 所述FGF2的终浓度为5~20ngmL； 所述Wnt3A的终浓度为5~20ngmL； 所述GluMax的终体积百分浓度为0.5~2%； 所述培养基D由以下组分组成：基础培养基DMEM，KSR、GluMax、TGFβ-3、BMP-4、地塞米松、抗坏血酸、脯氨酸和iTS-plus； 所述KSR的终体积百分浓度为3~5%； 所述GluMax的终体积百分浓度为0.5~1.5%； 所述TGFβ-3的终浓度为5~10ngmL； 所述BMP-4的终浓度为10~20ngmL； 所述地塞米松的终浓度为80~120nM； 所述抗坏血酸的终浓度为30~80μgmL； 所述脯氨酸的终浓度为20~60μgmL； 所述iTS-plus的终体积百分浓度为0.8~1.2%； 所述培养基E由以下组分组成：基础培养基DMEM，KSR、GluMax、NEAA、丙酮酸、地塞米松、GDF5、FGF2、iTS-plus、抗坏血酸和脯氨酸； 所述KSR的终体积百分浓度为3~5%； 所述GluMax的终体积百分浓度为0.5~1.5%； 所述NEAA的终体积百分浓度为0.5~1.5%； 所述丙酮酸的终体积百分浓度为0.5~1.5%； 所述地塞米松的终浓度为80~120nM； 所述GDF5的终浓度为100ngmL； 所述FGF2的终浓度为1~5ngmL； 所述iTS-plus的终体积百分浓度为0.5~1.5%； 所述抗坏血酸的终浓度为30~80μgmL； 所述脯氨酸的终浓度为20~60μgmL。

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