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龙图腾网获悉华南理工大学申请的专利一种灯盏细辛查尔酮合酶活性和/或选择性增强的突变体及其筛选方法与应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120442755B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-16发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510947389.9，技术领域涉及：C12Q1/48；该发明授权一种灯盏细辛查尔酮合酶活性和/或选择性增强的突变体及其筛选方法与应用是由娄文勇;李梅;曹宇飞;李广健;谢薇设计研发完成，并于2025-07-10向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种灯盏细辛查尔酮合酶活性和/或选择性增强的突变体及其筛选方法与应用在说明书摘要公布了：本发明公开一种灯盏细辛查尔酮合酶活性和或选择性增强的突变体及其筛选方法与应用。本发明构建以p‑香豆酸为底物合成根皮素的重组质粒，通过结构预测和催化机制，筛选出与EbCHS催化活性和选择性相关的位点，再实验筛选得到有效突变体和有效突变位点；将EbCHS与不同CHS序列比对，筛选实验，得到与前述有效突变位点邻近的非保守氨基酸位点的有效突变体；将得到的两种有效突变体进行两两组合，得到相关检测信息；依据前述实验信息建库以及机器学习建模预测，实验验证，获得在根皮素合成途径中活性和选择性显著增强的EbCHS，能以p‑香豆酸为底物高效合成根皮素，且降低副产物，为促进根皮素的工业化生产提供了技术支持。

本发明授权一种灯盏细辛查尔酮合酶活性和/或选择性增强的突变体及其筛选方法与应用在权利要求书中公布了：1.一种灯盏细辛查尔酮合酶活性和选择性增强的突变体的筛选方法，其特征在于包括如下步骤： （1）将Pc4CL编码基因、ScTSC13编码基因和EbCHS编码基因构建于同一个载体骨架上，得到重组质粒； （2）通过对EbCHS三维结构的预测，根据CHS催化机制，初步筛选出与EbCHS催化活性和选择性相关的位点； （3）对步骤（2）筛选出的位点构建单个位点饱和突变的质粒，再转化入酿酒酵母底盘细胞中，在尿嘧啶缺陷型琼脂板培养，得到重组菌株；接着在含p-香豆酸的发酵培养基中培养重组菌株，测定发酵液中的根皮素和副产物，筛选得到与EbCHS催化活性和选择性相关的有效突变体，得到有效突变位点；所述的有效突变体为EbCHSF168Y、EbCHSP84S、EbCHST200C、EbCHSS341A、EbCHSS211G； （4）将EbCHS与不同植物来源的CHS序列比对，筛选步骤（3）得到的有效突变位点邻近的非保守氨基酸位点；所述的非保守氨基酸位点为N83、S85、A169、G171、V199、L212和C344； （5）对步骤（4）筛选出的位点构建单个位点饱和突变的质粒，再转化入酿酒酵母底盘细胞中，在尿嘧啶缺陷型琼脂板培养，得到重组菌株；在含p-香豆酸的发酵培养基中培养重组菌株，测定发酵液中的根皮素和副产物，筛选得到非保守氨基酸有效突变体；所述的非保守氨基酸有效突变体为EbCHSC344S； （6）依据步骤（3）得到的有效突变体和步骤（5）得到的非保守氨基酸有效突变体信息，设计每个EbCHS突变体中含有两个位点突变组合的序列；接着构建含有两个位点突变的质粒，再转化入酿酒酵母底盘细胞中，在尿嘧啶缺陷型琼脂板培养，得到重组菌株；接着在含p-香豆酸的发酵培养基中培养重组菌株，测定发酵液中的根皮素和副产物，得到相关信息； （7）将步骤（3）得到的有效突变位点和步骤（4）得到的非保守氨基酸位点分别进行单个位点饱和突变，与步骤（6）得到的两个突变组合，得到突变序列库； （8）依据步骤（3）、步骤（5）、步骤（6）的检测结果，对步骤（7）得到的突变序列库进行机器学习和预测，再依据EbCHS活性预测的突变序列构建得到含有突变的质粒，转入酿酒酵母底盘细胞中，在尿嘧啶缺陷型琼脂板培养，得到重组菌株；在含p-香豆酸的发酵培养基中培养重组菌株，测定发酵液中的根皮素和副产物，筛选得到灯盏细辛查尔酮合酶活性和选择性增强的突变体，为EbCHSF168Y,S211G,C344A、EbCHSF168Y,S211G,C344S或EbCHSF168Y ,V199I,S211G,C344A； 步骤（1）中所述的Pc4CL编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示； 步骤（1）中所述的ScTSC13编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示； 步骤（1）中所述的EbCHS编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示； 步骤（2）中所述的CHS催化机制为MsCHS的催化机制； 步骤（3）、步骤（5）、步骤（6）和步骤（8）中所述的副产物为柚皮素和2H-BNY。

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