南京灿辰微生物科技有限公司丁昊天获国家专利权
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龙图腾网获悉南京灿辰微生物科技有限公司申请的专利一种检测细菌菌株耐药酶基因的引物组及分型检测方法及试剂盒获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118581243B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-12发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410758303.3,技术领域涉及:C12Q1/689;该发明授权一种检测细菌菌株耐药酶基因的引物组及分型检测方法及试剂盒是由丁昊天;汪辉;刘聪设计研发完成,并于2024-06-13向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种检测细菌菌株耐药酶基因的引物组及分型检测方法及试剂盒在说明书摘要公布了:本发明属于微生物学和遗传学技术领域,尤其涉及一种检测细菌菌株耐药酶基因的引物组及分型检测方法及试剂盒,所述引物组为耐β‑内酰胺酶基因和耐碳青霉烯酶基因的扩增引物,所述耐β‑内酰胺酶基因包括SHV、TEM、CTX‑M,所述耐碳青霉烯酶基因包括NDM、OXA‑23、KPC。根据特定的酶分型引物进行PCR扩增,采用磁珠法提取基因组DNA,以提高DNA提取的效率和纯度,从而优化PCR的准确性和效率,通过琼脂糖凝胶电泳和后续测序分析,与NCBI数据库对比确认具体酶分型结果。简化了实验流程,降低了成本,并为新型β‑内酰胺酶和碳青霉烯酶抑制剂的筛选及临床用药提供科学依据,具有高效、准确和成本效益高的优点。
本发明授权一种检测细菌菌株耐药酶基因的引物组及分型检测方法及试剂盒在权利要求书中公布了:1.一种非诊断目的的细菌菌株耐药酶基因分型检测方法,其特征在于,包括以下步骤: S1,利用磁珠试剂盒提取待检测菌株基因组DNA; S2,将S1中提取的待检测菌株DNA作为模板,利用引物组对该待检测菌株的靶基因进行PCR扩增; S3,通过凝胶电泳,检测S2中所得的扩增产物,进行耐药基因检测结果鉴定; S4,将S3中经过耐药基因检测后的扩增产物进行核酸序列测定; S5,将S4中的测定的6个靶基因的序列与对应靶基因的酶型标准序列进行序列比对分析,以确定具体的靶基因的基因分型; 所述引物组为SHV、TEM、CTX-M、NDM、OXA-23和KPC的扩增引物; 所述引物组的核苷酸序列如SEQIDNO.1~SEQIDNO.12所示; 所述磁珠试剂盒包括裂解液、磁珠、吸附缓冲液、洗涤液和洗脱液; 所述裂解液由终浓度0.1wt%SDS、终浓度0.5wt%Triton-100和终浓度0.5wt%β-巯基乙醇组成,pH为7; 所述吸附缓冲液由终浓度4molL的盐酸胍、终浓度800mmolL氯化钠、终浓度200mmolL柠檬酸钠、终浓度1mmolLEDTA和终浓度75wt%异丙醇组成; 所述洗涤液为浓度70wt%的乙醇溶液; 所述洗脱液由终浓度10mmolLTris-HCl和终浓度1mmolLEDTA组成; 步骤S2中PCR扩增的程序如下: 95℃预变性3min,95℃变性15s,55℃退火1min,72℃延伸5min,进行30次循环,最后72℃延伸5min; 所述待检测菌株选自大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯菌中至少一种。
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