四川迪亚生物科技集团有限公司王书崎获国家专利权
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龙图腾网获悉四川迪亚生物科技集团有限公司申请的专利一种基于阶梯乳化液滴的高通量CTCs分离培养方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119040266B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-12发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411050297.2,技术领域涉及:C12N5/09;该发明授权一种基于阶梯乳化液滴的高通量CTCs分离培养方法是由王书崎;胡文琪;吴迪;武国华;周煜森设计研发完成,并于2024-08-01向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于阶梯乳化液滴的高通量CTCs分离培养方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于阶梯乳化液滴的高通量CTCs分离培养方法,首先,设计制备特定结构的高通量分析芯片;芯片为上下两层结构,上层为水相流动层,下层为油相流动层;水相流动层包括水相入口和8个喷嘴阵列;水相为包裹白细胞、CTCs的GelMA溶液;油相流动层包括油相入口和8个油相通道,每个喷嘴阵列的下方设置1个油相通道,由喷嘴喷出的水相液滴滴入油相通道中形成油包水乳液;乳液经过紫外灯固化形成单细胞的液滴微球,收集微球进行破乳、离心获得含有白细胞和CTCs的单细胞微球;将单细胞微球进行无血清DMEM培养,通过营养耗竭的方式去除白细胞,进行成球CTCs计数和培养。该方法的液滴生成速率快,吞吐量高,有利于快速完成临床血样的检测。
本发明授权一种基于阶梯乳化液滴的高通量CTCs分离培养方法在权利要求书中公布了:1.一种基于阶梯乳化液滴的高通量CTCs分离培养方法,其特征在于,步骤如下: S1、制备高通量分析芯片; 所述芯片为上下两层结构,上层为水相流动层,下层为油相流动层;所述水相流动层包括水相入口和喷嘴阵列,进入水相入口的水流被一分为八形成8个并列的支路,每个支路并列平行连接两列喷嘴,即形成1个喷嘴阵列,共计形成8个喷嘴阵列;每列喷嘴中包括上百个喷嘴;所述油相流动层包括油相入口和8个油相通道,油相入口和水相入口分别位于芯片的左右两端相对设置,每个喷嘴阵列的下方设置1个油相通道,油相通道上部敞口用于接收喷嘴喷出的水相液滴;8个油相通道并列设置且一端与油相入口连通,另一端设置液体出口;由喷嘴喷出的水相液滴滴入油相通道中与油相形成油包水乳液,最后从液体出口排出; S2、制备白细胞; S3、将油相从油相入口泵入到芯片的油相通道中,从水相入口泵入水相,所述水相为包裹白细胞、CTCs及光引发剂的多孔GelMA溶液,控制水相的泵入速率为500μLmin,油相的泵入速率为200μLmin,水相采用阶梯的方式进入油相通道与油相进行乳化形成液滴;所述油相为Drop-Surf微液滴生成油;所述光引发剂为苯基2,4,6-三甲基苯甲酰基磷酸锂盐,用量浓度为1%; S4、当油相通道中形成大量液滴后,乳液从液体出口排出,将乳液在365nm紫外灯下进行固化,固化时间大于5min,形成单细胞的液滴微球; S5、收集获得的微球进行破乳、离心后去除包裹的油相,获得含有白细胞和CTCs的单细胞微球; S6、将单细胞微球进行无血清培养基培养,在培养过程中白细胞逐渐失去活力,而CTCs成球生长,即通过营养耗竭的方式去除白细胞,进行成球CTCs计数和培养。
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