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上海多宁生物科技股份有限公司王龙获国家专利权

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龙图腾网获悉上海多宁生物科技股份有限公司申请的专利一种高表达的CHO细胞培养方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118909927B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-12发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411278682.2,技术领域涉及:C12N5/071;该发明授权一种高表达的CHO细胞培养方法是由王龙;曾娇;王猛设计研发完成,并于2024-09-12向国家知识产权局提交的专利申请。

一种高表达的CHO细胞培养方法在说明书摘要公布了:本申请公开了一种高表达的CHO细胞培养方法,涉及生物细胞培养技术领域,具体包括如下步骤:S1:将冻存的CHO细胞在培养基里复苏;其中,培养基中额外添加混合脂类,混合脂类为吐温80、生育酚、亚麻酸、胆固醇中二至四种物质组合而成;S2:每2‑3天进行一次传代操作S3:再次传代;S4:按照S2和S3方法传代2‑4次,细胞群体倍增时间稳定后开始接种,S5:培养后使用补料培养基进行批次补料;S6:培养14天‑16天收获,检测蛋白浓度;解决了细胞培养过程中细胞存在密度低、活率低、乳酸积累、蛋白产量低等问题,改善CHO细胞的生长和表达,降低了企业成本,也减少了实际工业生产过程由乳酸积累引发的技术问题。

本发明授权一种高表达的CHO细胞培养方法在权利要求书中公布了:1.一种高表达的CHO细胞培养方法,其特征在于,具体包括如下步骤: S1:将冻存的CHO细胞在培养基里复苏,将细胞置于37℃、8%二氧化碳、110-130rpm条件下的摇床中培养; 其中,所述培养基中额外添加混合脂类,混合脂类由吐温80、生育酚、亚麻酸、胆固醇四种物质组合而成; 吐温80:0.025-0.75mgL,生育酚:0.1-3mgL,亚麻酸:0.225-6.75mgL,胆固醇:0.15-4.5mgL; 所述CHO细胞为CHOK1细胞; S2:每2-3天进行一次传代操作,保持细胞处于早期对数生长期,细胞接种密度为0.3-1.0-1.0×106cellsmL; S3:当细胞密度达到4.5-6.0×106cellsmL,细胞活率≥95%,间隔2-3天时,再次传代; S4:按照S2和S3方法传代2-4次,细胞群体倍增时间稳定后开始接种,将细胞接种至所述培养基,125mL摇瓶或5L搅拌罐式生物反应器中进行培养; S5:培养后使用补料培养基进行批次补料; 其中,补料3-8%,至培养结束前1-2天停止补料; S6:培养14天-16天收获,检测蛋白浓度; 其中,蛋白为抗体; 所述混合脂类的添加以分步的方式进行,包括初始添加和补料补脂; 所述初始添加,在培养基配置阶段添加; 添加量按照各物质分别的添加总量的百分比计,吐温80为75%;生育酚为80%;亚麻酸为50%;胆固醇为50%; 剩余部分混合脂类在步骤S5,使用补料培养基进行批次补料的同时添加,补料补脂; 所述补料补脂为,混合脂类与补料同时添加,混合脂类在不同细胞生长阶段的添加量不同; 其中,细胞生长阶段分为初期,中期和后期;初期为细胞培养的0-6天,添加3次;中期为细胞培养的6-10天,添加2次;后期为细胞培养的10-14天,添加1次; 每次添加量按照各物质分别的添加总量的百分比计为: 初期,吐温80为6%,生育酚为2%,亚麻酸为7%,胆固醇为8%; 中期,吐温80为3%,生育酚为4%,亚麻酸为11.5%,胆固醇为9.5%; 后期,吐温80为1%,生育酚为6%,亚麻酸为6%,胆固醇为7%。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人上海多宁生物科技股份有限公司,其通讯地址为:201400 上海市奉贤区望园路1698弄29号20幢110室;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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