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龙图腾网获悉江苏省农业科学院申请的专利靶向敲除牛FGFR1基因的sgRNA在构建牛乳腺上皮细胞系中的应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120272530B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-12发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510764006.4，技术领域涉及：C12N15/85；该发明授权靶向敲除牛FGFR1基因的sgRNA在构建牛乳腺上皮细胞系中的应用是由陈坤琳;王慧利;高林娜;夏淑雯;沈阳阳;丁强;曹少先;崔兆康;张建丽;张俊;仲跻峰设计研发完成，并于2025-06-10向国家知识产权局提交的专利申请。

本靶向敲除牛FGFR1基因的sgRNA在构建牛乳腺上皮细胞系中的应用在说明书摘要公布了：本发明公开了靶向敲除牛FGFR1基因的sgRNA在构建牛乳腺上皮细胞系中的应用，所述sgRNA核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。利用本发明sgRNA通过CRISPRCas9技术构建获得的乳腺上皮细胞系，FGFR1蛋白表达量显著下调，且敲除FGFR1基因后对乳腺上皮细胞活力和增殖情况均无显著影响，细胞中增殖关键基因PCNA、Cyclin D1、CyclinE1的mRNA表达均未出现显著变化，但乳蛋白合成相关基因（如CSN1S1、CSN2、CSN3、EFL5）、乳糖合成相关基因（GLUT1和HKⅡ）及乳脂合成相关基因（SCD‑1）的表达均显著降低，为深入解析FGFR1在乳腺上皮细胞增殖、泌乳合成等生物学行为中的调控机制提供了关键工具。

本发明授权靶向敲除牛FGFR1基因的sgRNA在构建牛乳腺上皮细胞系中的应用在权利要求书中公布了：1.sgRNA在构建FGFR1基因敲除的牛乳腺上皮细胞系中的应用，其特征在于，所述sgRNA核苷酸序列：AGCAACCGCACGCGCATCAC（SEQIDNO：1）；构建牛乳腺上皮细胞系的方法包括： （1）构建sgRNA表达载体：将sgRNA引物退火获得双链DNA片段，通过DNA连接酶将双链DNA片段连接到表达载体上，获得sgRNA表达载体； sgRNA的引物核苷酸序列如下所示： sgRNA-F：accgAGCAACCGCACGCGCATCAC（SEQIDNO：2）， sgRNA-R：aaacGTGATGCGCGTGCGGTTGCT（SEQIDNO：3）； （2）牛乳腺上皮细胞电转染：将sgRNA表达载体和Cas9表达载体电转染牛乳腺上皮细胞，sgRNA表达载体带有红色荧光基因；48h后添加嘌呤霉素和杀稻瘟菌素进行药筛7d，随后使用完全培养基恢复培养2d； （3）单克隆细胞株筛选与检测：从恢复培养的细胞中筛选出带有红色荧光的细胞继续扩大培养，提取扩大培养的各细胞总DNA作为模板，使用检测引物进行PCR扩增，通过对扩增产物进行测序来确定实现FGFR1基因敲除的牛乳腺上皮细胞株。

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