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龙图腾网获悉深圳海普洛斯医学检验实验室申请的专利一种人免疫组库测序的方法及试剂盒获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114774517B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-09发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210381164.8，技术领域涉及：C12Q1/6806；该发明授权一种人免疫组库测序的方法及试剂盒是由许明炎;张晓妮;周书雄设计研发完成，并于2022-04-12向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种人免疫组库测序的方法及试剂盒在说明书摘要公布了：本申请公开了一种人免疫组库测序的方法及试剂盒。本申请方法包括，用第一引物对模板核酸进行一次延伸；第一引物包括平台上游引物结合区、UMI和靶标上游引物序列，其部分T替换为dU；向反应体系加入第二引物进行一次延伸；第二引物包括平台下游引物结合区和靶标下游引物序列；向反应体系加入UDGUNG酶消化dU；消化后向反应体系加入第三引物进行PCR；第三引物为第一引物平台上游引物结合区序列；第一和第二引物的靶标序列为针对人TCR基因设计的特异性序列。本申请方法全覆盖人免疫组库TCR的CDR3，捕获效率高；通过引物的特殊设计，依序向反应体系中加入三种引物，实现使每个原始模板核酸只对应一个UMI，校正每个靶点扩增性偏差，实现靶标基因拷贝数定量检测。

本发明授权一种人免疫组库测序的方法及试剂盒在权利要求书中公布了：1.一种人免疫组库测序的方法，其特征在于：包括以下步骤， 配制反应体系，采用第一引物对模板核酸进行一次延伸，得到互补链；所述第一引物由5’端到3’端依序包括测序平台上游引物结合区、唯一性标识符和靶标特异性上游引物序列；并且，所述第一引物中，测序平台上游引物结合区和靶标特异性上游引物序列中的碱基T替换为脱氧尿嘧啶，所述测序平台上游引物结合区对应测序平台的上游测序引物的3’末端； 第一引物延伸结束后，向反应体系中加入第二引物，利用第二引物对第一引物延伸的互补链进行一次延伸，获得由测序平台上游引物结合区、唯一性标识符、靶标序列和测序平台下游引物结合区组成的产物；所述第二引物由5’端到3’端依序包括测序平台下游引物结合区和靶标特异性下游引物序列，所述测序平台下游引物结合区对应测序平台的下游测序引物的3’末端； 第二引物延伸结束后，向反应体系中加入UDGUNG酶消化脱氧尿嘧啶，从而消化第一引物以及第一引物的延伸链； UDGUNG酶消化完成后，向反应体系中加入第三引物，利用第三引物和第二引物对第二引物延伸的产物进行PCR扩增富集，获得所述模板核酸的所有扩增子都添加相同唯一性标识符的产物；所述第三引物为第一引物的测序平台上游引物结合区自5’端起的全部或部分序列，并且，第三引物中的碱基T不被替换为脱氧尿嘧啶； 对PCR扩增富集获得的所有扩增子都添加相同唯一性标识符的产物进行测序文库构建和测序，即完成人免疫组库测序； 所述靶标特异性上游引物序列和所述靶标特异性下游引物序列为针对人T细胞受体编码基因设计的全覆盖其CDR3区域编码基因序列的特异性引物序列； 所述第一引物由SeqIDNo.1至SeqIDNo.40所示序列的40条引物组成； 所述第二引物由SeqIDNo.41至SeqIDNo.52所示序列的12条引物组成； 所述第三引物为SeqIDNo.53所示序列。

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