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龙图腾网获悉西湖大学申请的专利分离、培养鸡原始生殖干细胞并构建基因修饰鸡的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN118147052B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-09发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202410428983.2，技术领域涉及：C12N5/0735；该发明授权分离、培养鸡原始生殖干细胞并构建基因修饰鸡的方法是由裴端卿;王晓民;赵程辰;王锴鹏;王壮飞;张盛虎设计研发完成，并于2024-04-10向国家知识产权局提交的专利申请。

本分离、培养鸡原始生殖干细胞并构建基因修饰鸡的方法在说明书摘要公布了：本发明涉及一种分离、培养鸡原始生殖干细胞并构建基因修饰鸡的方法。在优化培养体系下，体外短期培养可获得百万级别细胞并稳定建系，且能够在体外培养200天以上并维持迁移能力。体外建系的PGCs基因修饰后，通过血管注射方法可以获得基因修饰鸡；同时，注射到鸡胚血管的PGCs在孵化第七天分选出来，在体外再培养后再注射到鸡胚血管中，可以提高构建基因修饰鸡的效率。本发明还涉及到PGCs冷冻，复苏存活率达到80％以上，可以对分离获得或是基因修饰后的PGCs进行长期保存。本发明具有分离、培养效率高的优点，同时两次血管注射的方法可以提高构建基因修饰鸡的效率，本发明在鸡PGCs体外分离、培养、建系、冷冻保种及构建基因修饰鸡等方面具有很好的应用前景。

本发明授权分离、培养鸡原始生殖干细胞并构建基因修饰鸡的方法在权利要求书中公布了：1.一种基于PGCs二次血管注射方法构建基因修饰鸡的方法，其特征在于，包括以下步骤： 构建基因修饰PGCs细胞系； 将得到的基因修饰PGCs细胞系通过外周血管注射的方法注射到发育50-52h的鸡胚中并继续孵化，注射完后在体外继续孵化到第七天，分离鸡胚性腺，获得PGCs，筛选出基因修饰的PGCs在体外继续培养扩增，扩增到一定数量后第二次将基因修饰的PGCs通过外周血管注射的方法注射到发育50-52h的鸡胚中并继续孵化，最终获得基因修饰鸡； 其中，构建基因修饰PGCs细胞系的方法为，包括以下步骤： （1）鸡胚的准备：将受精种蛋在孵化箱内进行孵化，孵化5-10天时取用； （2）PGCs的分离：从孵化箱中取出孵化5-10天鸡胚，分离出性腺，用预热的PBS清洗，以每个鸡胚的一对性腺为一组，0.05%胰酶37℃消化8分钟后加入PGCs培养基吹打至性腺组织块成为细胞悬液； （3）将细胞悬液利用差速贴壁法纯化PGCs； （4）PGCs的原代培养：用PGCs培养基培养，每天更换培养基，每3-4天传代一次，更换Feeder饲养层； （5）PGCs传代培养和建系：将步骤（4）培养所得的原始生殖干细胞在培养至第8天时，以1：3的比例传代至含有新饲养层的12孔板培养基中，每天更换培养基，获得建系后PGCs； 从鸡胚性腺中分离PGCs并在体外培养扩增，之后对PGCs中基因进行基因修饰，所述基因修饰包括转基因、基因敲除和基因敲入，得到基因修饰PGCs细胞系，其中，培养条件与PGCs的培养条件相同； 其中，PGCs培养基组成成份为：基础培养基为KO-DMEM，2％vv）鸡血清，20％vv胎牛血清，100丙酮酸钠，100GlutaMax，100NEAA，1GSnucleosidesupplement，0.1mMβ-巯基乙醇，4ngmlFGF2，6ngmlSCF。

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