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龙图腾网获悉华中科技大学;海南大学三亚研究院申请的专利一种基于双色荧光标记的肿瘤细胞焦亡模型的构建方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116004545B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-05发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211673577.X，技术领域涉及：C12N5/10；该发明授权一种基于双色荧光标记的肿瘤细胞焦亡模型的构建方法是由祁淑红;张杰;张智红设计研发完成，并于2022-12-26向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于双色荧光标记的肿瘤细胞焦亡模型的构建方法在说明书摘要公布了：本发明提供了一种基于双色荧光标记的肿瘤细胞焦亡模型的构建方法，所述方法包括：构建双色荧光蛋白标记细胞焦亡效应基因GSDME和组蛋白基因H2B的PB载体质粒；筛选稳定表达双色荧光蛋白标记的GSDME和H2B的B16肿瘤细胞焦亡细胞株；使用Caspase‑3活化的药物刺激双色荧光蛋白标记的GSDME和H2B的B16肿瘤细胞焦亡细胞株，通过荧光显微成像可视化B16肿瘤细胞焦亡过程以及细胞活性检测。本发明一方面能够直观可视化观察肿瘤细胞焦亡发生时细胞核以及细胞形态学的变化；另一方面本发明建立的B16肿瘤细胞焦亡细胞株模型可作为筛选诱导细胞焦亡药物的有力工具，为进一步探究可视化细胞焦亡激起的免疫学分子机制提供手段。

本发明授权一种基于双色荧光标记的肿瘤细胞焦亡模型的构建方法在权利要求书中公布了：1.一种基于双色荧光标记的肿瘤细胞焦亡模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括： 构建双色荧光蛋白标记细胞焦亡效应基因GSDME和组蛋白基因H2B的PB载体质粒，所述双色荧光蛋白为mCerulean和mCherry；包括：使用限制性内切酶切开PB载体，使PB载体线性化；用mCerulean标记GSDME片段，获得GSDME-mCerulean片段；使用mCherry标记H2B片段，获得H2B-mCherry片段；将所述GSDME-mCerulean片段和所述H2B-mCherry片段构建到PB载体上，获取双色荧光蛋白标记GSDME-mCerulean和H2B-mcherry的PB载体质粒，所述GSDME-mCerulean片段和所述H2B-mCherry片段通过IRES-linker连接起来，以使两个荧光蛋白标记的分子能够独立表达；所述IRES的碱基序列为：CTCGAGTACTCCGGTATTGCGGTACCCTTGTACGCCTGTTTTATACTCCCTTCCCGTAACTTAGACGCACAAAACCAAGTTCAATAGAAGGGGGTACAAACCAGTACCACCACGAACAAGCACTTCTGTTTCCCCGGTGATGTCGTATAGACTGCTTGCGTGGTTGAAAGCGACGGATCCGTTATCCGCTTATGTACTTCGAGAAGCCCAGTACCACCTCGGAATCTTCGATGCGTTGCGCTCAGCACTCAACCCCAGAGTGTAGCTTAGGCTGATGAGTCTGGACATCCCTCACCGGTGACGGTGGTCCAGGCTGCGTTGGCGGCCTACCTATGGCTAACGCCATGGGACGCTAGTTGTGAACAAGGTGTGAAGAGCCTATTGAGCTACATAAGAATCCTCCGGCCCCTGAATGCGGCTAATCCCAACCTCGGAGCAGGTGGTCACAAACCAGTGATTGGCCTGTCGTAACGCGCAAGTCCGTGGCGGAACCGACTACTTTGGGTGTCCGTGTTTCCTTTTATTTTATTGTGGCTGCTTATGGTGACAATCACAGATTGTTATCATAAAGCGAATTGGATAGGATCCGTACGATGGTGGTAGGGATCCG； 筛选稳定表达双色荧光蛋白标记的GSDME和H2B的B16肿瘤细胞焦亡细胞株； 使用Caspase-3活化的药物刺激双色荧光蛋白标记的GSDME和H2B的B16肿瘤细胞焦亡细胞株，通过荧光显微成像可视化B16肿瘤细胞焦亡过程以及细胞活性检测。

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