广西壮族自治区药用植物园潘丽梅获国家专利权
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龙图腾网获悉广西壮族自治区药用植物园申请的专利桑寄生种子总蛋白提取方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116284208B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-05发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310198172.3,技术领域涉及:C07K1/14;该发明授权桑寄生种子总蛋白提取方法是由潘丽梅;韦树根;覃雅;万凌云;宋利沙;付金娥设计研发完成,并于2023-03-03向国家知识产权局提交的专利申请。
本桑寄生种子总蛋白提取方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种桑寄生种子总蛋白提取方法,其包括以下步骤:1将桑寄生新鲜种子用无菌水洗净,置于液氮预冷的研钵中,加入聚乙烯吡咯烷酮,于液氮中研磨粉碎,获得粉碎物;2将粉碎物放入预冷的EP管中,加入RIPA蛋白裂解液及PMSF溶液,振荡摇匀后置于冰面上裂解;3裂解结束后用进行粉碎,离心,获取第一上清液;4往第一上清液中再次加入RIPA蛋白裂解液,冰面上裂解,离心,获取第二上清液;5往第二上清液中加入预冷丙酮,于‑20℃沉淀过夜,离心,获取蛋白沉淀,蛋白沉淀自然状态下晾干,用蛋白裂解液溶解;6蛋白质溶液水浴加热后,冰浴冷却,离心,取上清,即得。本发明具有提高蛋白质的提取效率,蛋白质提取过程不易降解等特点。
本发明授权桑寄生种子总蛋白提取方法在权利要求书中公布了:1.桑寄生种子总蛋白提取方法,其特征在于,包括以下步骤: 1将除去果皮和果胶后的桑寄生新鲜种子用无菌水洗净,置于液氮预冷的研钵中,加入聚乙烯吡咯烷酮,于液氮中研磨粉碎,获得粉碎物;其中,桑寄生新鲜种子的质量为2-4g,聚乙烯吡咯烷酮的质量为1-3g; 2将粉碎物放入预冷的EP管中,加入RIPA蛋白裂解液及PMSF溶液,振荡摇匀后将EP管置于冰面上裂解;其中,RIPA蛋白裂解液的体积为5-10mL,RIPA蛋白裂解液与PMSF溶液的体积比为1:100; 3裂解结束后用手提式高速分散器进行粉碎,离心,获取第一上清液;其中,手提式高速分散器粉碎时间为1-5min,在4℃条件下,离心转速为5000rpm,离心15min; 4往第一上清液中再次加入RIPA蛋白裂解液,冰面上裂解,离心,获取第二上清液;其中,RIPA蛋白裂解液的体积为3-5mL,冰上裂解15~35min,在4℃条件下,以5000rpm离心15min; 5往第二上清液中加入预冷丙酮,于-20℃沉淀过夜,离心,获取蛋白沉淀,蛋白沉淀自然状态下晾干,用RIPA蛋白裂解液溶解,得到蛋白质溶液;其中,预冷丙酮的体积为第二上清液体积的3-5倍,在4℃条件下,5000rpm离心15min 6蛋白质溶液95℃水浴5-10min,然后迅速冰浴5min,以5000rpm,离心10min,取上清,即得。
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