韶关学院张光林获国家专利权
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龙图腾网获悉韶关学院申请的专利一种植物源仿凋亡细胞外囊泡及其制备方法和应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119258034B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-05发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410983029.X,技术领域涉及:A61K9/50;该发明授权一种植物源仿凋亡细胞外囊泡及其制备方法和应用是由张光林;曾戎;陈洁;李翔;于白音设计研发完成,并于2024-07-22向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种植物源仿凋亡细胞外囊泡及其制备方法和应用在说明书摘要公布了:本发明属于纳米生物技术领域,公开了一种植物源仿凋亡细胞外囊泡及其制备方法和应用。该制备方法包括以下步骤:从植物组织提取出植物源外囊泡,并将植物源外囊泡与含凋亡信号磷脂酰丝氨酸PS溶液共融合,得到所述植物源仿凋亡细胞外囊泡。本发明的植物源仿凋亡细胞外囊泡,来源于天然植物,与哺乳动物细胞来源的凋亡细胞囊泡相比,具有良好的生物相容性,不易引起机体免疫排斥反应;经过磷脂酰丝氨酸PS修饰后,与天然的植物源外囊泡相比,本发明的植物源仿凋亡细胞外囊泡,其巨噬细胞靶向性、抑制巨噬细胞炎症反应和改善RA的效果得到了显著提升。
本发明授权一种植物源仿凋亡细胞外囊泡及其制备方法和应用在权利要求书中公布了:1.一种植物源仿凋亡细胞外囊泡的制备方法,其特征在于,包括如下步骤: 将5g铁皮石斛茎段用无菌水或去离子水反复清洗去除表面灰尘和微生物;将清洗后的铁皮石斛茎段自然晾干;将晾干后的铁皮石斛茎段与25mL磷酸盐缓冲溶液pH7.0混合处理,孵育12h;加入浓度为1mgg茎段的果胶蛋白酶和浓度为2mgg茎段的纤维素酶进行酶解,酶解时间12h,温度24℃;收集全部酶解后的汁液,先以3000g离心30min;收集上清液,再以10000g离心1.5h后取上清液;使用超高速离心机将该上清液离心2.5h,转速为150000g;超高速离心后取沉淀部分;采用蔗糖梯度离心法再用超高速离心机以150000g离心1.5h,蔗糖溶液为8%gv、30%gv、45%gv和60%gv;选择在30-45%的一层提取纯化的铁皮石斛外囊泡,吸取4mL;加入5倍体积的PBS,用超滤管将蔗糖去除换成PBS;通过上述步骤,即可得到高纯度的铁皮石斛外囊泡DONVs; 将1μmol的二油酰基磷脂酰丝氨酸DOPS、7μmol的磷脂酰胆碱和2μmol的胆固醇混合溶解在10mL有机溶剂中;所述有机溶剂为氯仿和乙醇,体积比为氯仿:乙醇=9:1,震荡混合均匀;经旋转蒸发仪40℃,20min蒸干有机溶剂,得到脂质薄膜;用1mLPBS溶液将脂质薄膜水化,得到PS脂质体浑浊液;使用探头超声仪超声1min,150W,直至溶液清澈透明;通过挤出仪使PS脂质体的粒径均一化,保持在200nm左右; 将PS脂质体PSLs与DONVs悬浮液按数量比3:1比例混合,在37℃下孵育60分钟,孵育过程机械搅拌来促进PSLs与DONVs的融合;将共融合后的混合物通过挤出仪使粒径均一化,保持在200nm左右,即为P-ApoVs1; 或, 将5g甘木通叶片用无菌水或去离子水反复清洗去除表面灰尘和微生物;将清洗后的甘木通叶片自然晾干;将晾干后的甘木通叶片与25mL磷酸盐缓冲溶液pH7.0混合处理,孵育12h;加入浓度为1mgg甘木通叶片的果胶蛋白酶和浓度为2mgg甘木通叶片的纤维素酶进行酶解,酶解时间12h,温度24℃;收集全部酶解后的汁液,先以3000g离心30min;收集上清液,再以10000g离心1.5h后取上清液;使用超高速离心机将该上清液离心2.5h,转速为150000g;超高速离心后取沉淀部分;采用蔗糖梯度离心法再用超高速离心机以150000g离心1.5h,蔗糖溶液为8%gv、30%gv、45%gv和60%gv;选择在30-45%的一层提取纯化的甘木通外囊泡,吸取4mL;加入5倍体积的PBS,用超滤管将蔗糖去除换成PBS;通过上述步骤,即可得到高纯度的甘木通外囊泡CFNVs; 将1μmol的二油酰基磷脂酰丝氨酸DOPS、7μmol的磷脂酰胆碱和2μmol的胆固醇混合溶解在10mL有机溶剂中;所述有机溶剂为氯仿和乙醇,体积比为氯仿:乙醇=9:1,震荡混合均匀;经旋转蒸发仪40℃,20min蒸干有机溶剂,得到脂质薄膜;用1mLPBS溶液将脂质薄膜水化,得到PS脂质体浑浊液;使用探头超声仪超声1min,150W,直至溶液清澈透明;通过挤出仪使PS脂质体的粒径均一化,保持在200nm左右; 将PS脂质体PSLs与DONVs悬浮液按数量比3:1比例混合,在37℃下孵育60分钟,孵育过程机械搅拌来促进PSLs与DONVs的融合;将共融合后的混合物通过挤出仪使粒径均一化,保持在200nm左右,即为P-ApoVs2。
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