买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

龙图腾网获悉科乐美(广州)生物科技有限公司;广州泽如新材料技术有限公司申请的专利一种酪氨酸硫酸化修饰的高活性重组水蛭素、酿酒酵母工程菌与应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120230658B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-09-05发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510726597.6，技术领域涉及：C12N1/19；该发明授权一种酪氨酸硫酸化修饰的高活性重组水蛭素、酿酒酵母工程菌与应用是由张鑫波;吴晚明;郭锡堆;陈登伟;麦俊健设计研发完成，并于2025-06-03向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种酪氨酸硫酸化修饰的高活性重组水蛭素、酿酒酵母工程菌与应用在说明书摘要公布了：本发明属于基因工程和合成生物学领域，具体涉及一种酪氨酸硫酸化修饰的高活性重组水蛭素、酿酒酵母工程菌与应用。本发明以酿酒酵母作为底盘细胞，通过基因工程改造，引入酪氨酸蛋白磺酸转移酶及相关酶与转运系统，实现水蛭素Tyr63位点的高效硫酸化修饰，显著提升其抗凝血活性。该方法克服了天然水蛭素提取成本高和现有重组技术缺乏修饰功能的局限。此外，本发明提供的酪氨酸硫酸化修饰的高活性重组水蛭素在美容护肤领域展现出优异抗氧化功效，实验证明其抗氧化活性与天然水蛭素相当。本发明为低成本、规模化生产高活性水蛭素提供了创新解决方案，兼具医药和化妆品应用潜力。

本发明授权一种酪氨酸硫酸化修饰的高活性重组水蛭素、酿酒酵母工程菌与应用在权利要求书中公布了：1.一种表达酪氨酸硫酸化修饰的高活性重组水蛭素的酿酒酵母工程菌的构建方法，其特征在于： Ⅰ.将片段通过醋酸锂法转化至酿酒酵母CEN.PK2-1D中，LEU营养缺陷培养基筛选阳性克隆，得到菌株ZR-01； 所述片段中，MET3p-MET3Δ-MET3t的核苷酸序列如SEQIDNo:2所示，MET14p-MET14-MET14t的核苷酸序列如SEQIDNo:3所示，LEU2p-LEU2的核苷酸序列如SEQIDNo:18所示，GAL7UP和GAL7DOWN的核苷酸序列分别如SEQIDNo:8-9所示； Ⅱ.将GAL1基因编辑质粒和GAL1UP-TDH3p-SLL-CYC1t-GAL1DOWN片段通过醋酸锂法转化至步骤Ⅰ获得的菌株ZR-01，筛选阳性转化子，得到工程菌株ZR-02；所述的GAL1基因编辑质粒通过如下方法制备得到：将TEF1p-Cas9-CYC1t-SNR52p-GAL1sgRNA-SUP4t片段插入出发质粒，得到GAL1基因编辑质粒；所述TEF1p-Cas9-CYC1t-SNR52p-GAL1sgRNA-SUP4t片段的核苷酸序列如SEQIDNo:19所示；所述GAL1UP-TDH3p-SLL-CYC1t-GAL1DOWN片段中，SLL的核苷酸序列如SEQIDNo:4所示，GAL1UP和GAL1DOWN的核苷酸序列分别如SEQIDNo:10-11所示； Ⅲ.将HO基因编辑质粒和HOUP-PGK1p-TPST1-PDC1t-HODOWN片段通过醋酸锂法转化至步骤Ⅱ获得的菌株ZR-02，筛选阳性转化子，得到含MET3Δ基因表达元件、MET14基因表达元件、SLL基因表达元件和TPST1基因表达元件的工程菌株；所述HO基因编辑质粒通过如下方法制备得到：将TEF1p-Cas9-CYC1t-SNR52p-HOsgRNA-SUP4t片段插入出发质粒，得到HO基因编辑质粒；所述TEF1p-Cas9-CYC1t-SNR52p-HOsgRNA-SUP4t片段核苷酸序列如SEQIDNo:20所示；所述HOUP-PGK1p-TPST1-PDC1t-HODOWN片段中，TPST1基因为突变型eTPST1基因，突变型eTPST1基因的名称分别为eTPST1T201R、eTPST1T201K或eTPST1T201H；其中，突变型eTPST1基因是在野生型eTPST1基因核苷酸序列的基础上进行突变，eTPST1T201R、eTPST1T201K或eTPST1T201H对应突变位点为野生型eTPST1基因核苷酸序列第601-603bp，对应突变核苷酸序列分别为AGA、AAA、CAT，所述野生型eTPST1基因的核苷酸序列如SEQIDNo:7所示；Ⅳ.以步骤Ⅲ获得的工程菌株为对象，通过醋酸锂法转入含重组水蛭素基因表达元件TEF1p-rHirudin-ADH1t的重组质粒，得到表达酪氨酸硫酸化修饰的高活性重组水蛭素的酿酒酵母工程菌ZR-13、ZR-14、ZR-15；所述的重组质粒如下方法制备得到：将TEF1p-rHirudin-ADH1t片段插入出发质粒，得到重组质粒；所述TEF1p-rHirudin-ADH1t片段中，rHirudin的核苷酸序列如SEQIDNo:1所示；所述ZR-13、ZR-14、ZR-15中分别包含eTPST1T201R、eTPST1T201K、eTPST1T201H； Ⅴ.将包含rDNA同源臂片段的融合基因表达元件rDNAUP-PGK1p-KanMX4-P2A-eTPST1T201K-PDC1t-rDNADOWN通过醋酸锂法转化至工程菌株ZR-02，G418筛选含高拷贝TPST1基因的菌株；在含高拷贝TPST1基因的菌株中转入含重组水蛭素基因表达元件TEF1p-rHirudin-ADH1t的重组质粒，得到表达酪氨酸硫酸化修饰的重组水蛭素的酿酒酵母工程菌ZR-16；所述的重组质粒如下方法制备得到：将TEF1p-rHirudin-ADH1t片段插入出发质粒，得到重组质粒；所述TEF1p-rHirudin-ADH1t片段中，rHirudin的核苷酸序列如SEQIDNo:1所示；rDNAUP和rDNADOWN的核苷酸序列分别如SEQIDNo:14-15所示，KanMX4抗性基因核苷酸序列为SEQIDNo:16所示，P2A自剪切肽核苷酸序列为SEQIDNo:17所示； 所述启动子TDH3p的核苷酸序列如NCBI数据库序列登记号CP029160.1第9954286位到9955085位所示；启动子PGK1p的核苷酸序列如NCBI数据库序列登记号CP135951.1第124102位到第124853位所示；启动子TEF1p的核苷酸序列如NCBI数据库序列登记号CP029160.1第707052位到第707481位所示；所述终止子CYC1t的核苷酸序列如NCBI数据库序列登记号KC879308.1第1301位到1607位所示；终止子PDC1t的核苷酸序列如NCBI数据库序列登记号CP029160.1第3660519位到3660915位所示；终止子ADH1t的核苷酸序列如NCBI数据库序列登记号CP029160.1第4671969位到4672126位所示； 步骤Ⅲ中所述HOUP-PGK1p-TPST1-PDC1t-HODOWN片段中，HOUP的核苷酸序列如下所示： TTACAGAAAGGGTTCGCAAGTCCTGTTTCTATGCCTTTCTCTTAGTAATTCACGAAATAAACCTATGGTTTA CGAAATGATCCACGAAAATCATGTTATTATTTACATCAACATATCGCGAAAATTCATGTCATGTCCACATTAACAT CATTGCAGAGCAACAATTCATTTTCATAGAGAAATTTGCTACTA； 步骤Ⅲ中所述HOUP-PGK1p-TPST1-PDC1t-HODOWN片段中，HODOWN的核苷酸序列如下所示： TGGTACCTACTACTTTGAATTGTACTACCGCTGGGCGTTATTAGGTGTGAAACCACGAAAAGTTCACCATAA CTTCGAATAAAGTCGCGGAAAAAAGTAAACAGCTATTGCTACTCAAATGAGGTTTGCAGAAGCTTGTTGAAGCATG ATGAAGCGTTCTAAACGCACTATTCATCATTAAATATTTAAAGCTCATAA。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术，可联系本专利的申请人或专利权人科乐美(广州)生物科技有限公司;广州泽如新材料技术有限公司，其通讯地址为：510000 广东省广州市花都区镜湖大道南58号2栋302房；或者联系龙图腾网官方客服，联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。